[发明专利]一种L-丙氨酸高效酶转化及其提取工艺

权利要求书

1.一种L-丙氨酸高效酶转化及提取工艺，包括游离细胞法酶转化反应、脱色、重结晶等步骤，其特征在于：产L-天冬氨酸-β-脱羧酶的睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D菌株发酵培养，以培养液作酶源，直接添加固体L-天冬氨酸，加入细胞通透剂EDTA和吐温-80，加入酶稳定剂磷酸吡哆醛，转化培养，L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶活达到55000~70000 U，培养液经过脱色、重结晶、干燥得到成品L-丙氨酸。

2.根据权利要求1所述的L-丙氨酸高效酶转化及提取工艺，其特征在于：具体操作步骤为：

（1）游离细胞培养液制备

取本单位一株睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D菌株活化并进行高密度发酵培养，获得游离细胞培养液，测定酶活力为45000~58000 U，取1 L游离细胞培养液进行后续酶转化反应，所述睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D菌株保藏编号为:CGMCC No.6083；

（2）游离细胞培养液活化

向上述游离细胞培养液中加入细胞通透剂，细胞通透剂为EDTA和吐温-80；

然后加入L--天冬氨酸-β-脱羧酶稳定剂，稳定剂为磷酸吡哆醛，调整pH为6.0，测定酶活力为55000~70000 U；

（3）酶转化反应

直接向步骤（2）游离细胞培养液中添加固体L-天冬氨酸，采用pH自动控制加液系统，在线监控反应pH值，通过PID控制器自动补加L-天冬氨酸，严格控转化液 pH在5.5-6.0之间，进行酶转化反应；L-丙氨酸的等电点pI=6.02，在整个酶转化过程中L-丙氨酸晶体不断析出，本工艺最终L-天冬氨酸转化率可达400~450%；

（4）脱色

将步骤（3）获得的转化液过滤收集粗晶体，用去离子水溶解，调整pH 4.5~5.0、温度50~55 ℃、L-丙氨酸浓度为15%~18%，加入质量分数为0.8~1.0% ZX-303活性炭脱色20~25 min，脱色率可达82.0%以上；

（5）重结晶

调整净化处理的L-丙氨酸溶液的pH，进行真空蒸发结晶，将获得的L-丙氨酸晶体，离心，干燥得到成品L-丙氨酸，纯度达99%以上。

3.根据权利要求1所述的L-丙氨酸高效酶转化及提取工艺，其特征在于：所述EDTA的加入量为0.5%~1.5%，吐温-80的加入量为0.05%~0.2%，所述磷酸吡哆醛的加入量为0.1~1.0mM。

4.根据权利要求1所述的L-丙氨酸高效酶转化及提取工艺，其特征在于：所述步骤5的重结晶的具体的工艺条件为净化处理的L-丙氨酸溶液的pH调整为6.0，温度50~70 ℃，真空度-0.05~0.08 MPa。