[发明专利]p-tau181抗原表位肽及其在阿尔茨海默病检测中的用途

说明书

本发明涉及p‑tau181抗原表位肽及其在阿尔茨海默病检测中的用途。由人p‑tau181抗原表位肽制备的p‑tau181抗原可用于制备抗体及检测试剂盒；本发明的人p‑tau181抗原表位肽的氨基酸序列为Ala‑Lys‑Thr‑Pro‑Pro‑Ala‑Pro‑Lys‑(p)Thr‑Pro‑Pro‑Ser‑Ser‑Gly。p‑tau181抗原可由人p‑tau181抗原表位肽与蛋白载体偶联制得；p‑tau181单克隆抗体或多克隆抗体由本发明的Aβ1‑42抗原制得；p‑tau181单克隆抗体或多克隆抗体用于制备p‑tau181体外诊断试剂盒；本发明的人p‑tau181抗原表位肽具有良好的抗原性，用其制备的抗原(免疫原)免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，从而可应用于人p‑tau181蛋白的体外检测。本发明能够以高纯度大批量制备人p‑tau181抗原表位肽。

技术领域

本发明属于多肽化学和免疫学领域，涉及一种p-tau181抗原表位肽，以及制备该p-tau181抗原表位肽的方法，使用该p-tau181抗原表位肽制备的p-tau181抗原，其可进一步制备相应的单克隆抗体或多克隆抗体，此外，此类抗体可用于制备人p-tau181体外诊断试剂盒，此类试剂盒例如可以用于检测阿尔茨海默病患者血清或血浆样本中的p-tau181蛋白浓度，为阿尔茨海默病的诊断提供有效的科学依据。

背景技术

已知p-tau181抗原表位肽具有如下氨基酸序列：AKTPPAPK-pTPPSSG，其为包含tau蛋白的181位苏氨酸(T181)磷酸化的第173～186位氨基酸片段CN114409780A(中国专利申请号202210138280.7)。该p -tau181抗原表位肽可用于检测阿尔茨海默患者体内磷酸化tau蛋白，这对于阿尔茨海默病的预测、早期发现及预防、病程发展和疗效观察是有益的。此外，CN111197040A(申请号2020100721960，亿彤生物) 公开了壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒，据信该发明的CHI3L1 抗原表位肽呈现良好的抗原性，用其制备的抗原(免疫原)免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体，从而可应用于人CHI3L1的体外检测。上述CN103665113A和CN111197040A公开的相关技术信息通过引用并入本文。

目前，阿尔茨海默病(AD)是老年人的常见病和多发病，又称老年性痴呆，60岁以上老人的发病率5％。AD是一种中枢神经系统原发性退行性疾病，患者进行性智力和认知功能降低。神经退行性疾病是由于神经元进行性变性、死亡导致的、以中枢神经系统损害为主的神经系统疾病，严重危害人类身体健康，但其病因不清，发病机理复杂，缺乏有效的治疗措施。除人们熟知的老年性痴呆(Alzheimer disease，AD)、帕金森氏病(Parkinson’sdisease，PD)等以外，在人群中发病率日趋增高、且发病年龄日趋下降的糖尿病晚期并发症均以神经退行性病变为首发因素。由于神经退行性疾病缺乏有效的早期诊断措施，给治疗、护理带来了一系列实实在在的问题，同时给社会和家庭造成了沉重的经济负担和精神压力。故研究神经退行性变发病机理和延缓、阻断其发展的干预手段，有着至关重要的意义。

作为引起老年痴呆最常见的病因，阿尔茨海默病临床上表现为智力水平的慢性削弱及记忆的慢性丢失。随着全球人口的老龄化，AD发病率也与日俱增，因此，AD的及时诊断与治疗必将越来越受到重视。

越来越多的研究显示，tau蛋白在人类多种组织内有表达，如血管肌细胞等，这就有可能在血浆中检测到tau蛋白的存在，已有研究证实，在血浆中可检测到tau蛋白，但AD与对照组无差别。如AD的病因因素在导致脑内p-tau蛋白产生增加时，也启动了外周p-tau蛋白的产生，或血脑屏障的功能下降导致脑内p-tau蛋白的溢出，都会使血浆中存在p-tau蛋白，且p-tau蛋白的增加是产生AD病理的病因基础，检测p-tau蛋白较检测tau蛋白更具特异性，因而对临床诊断是有价值的。已有诸多文献对AD患者进行血浆p-tau(181P)蛋白检测，结果显示AD患者血浆中确实有p-tau(181P)蛋白的存在，且AD中后期患者p -tau(181P)蛋白的血浆浓度明显增高，较健康对照组有着较高的特异性。