[发明专利]猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR检测方法

权利要求书

1.一种非诊断用途的猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述方法包括使用以下引物进行Taqman多重荧光定量PCR：

序列为SEQ ID NO.1的PCV1-F、序列为SEQ ID NO.4的PCV2-F、序列为SEQ ID NO.7的PCV3-F、序列为SEQ ID NO.10的PCV4-F、序列为SEQ ID NO.2的PCV1-R、序列为SEQ ID NO.5的PCV2-R、序列为SEQ ID NO.8的PCV3-R、序列为SEQ ID NO.11的PCV4-R。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述Taqman多重荧光定量PCR中还使用以下探针：序列为SEQ ID NO.3的PCV1-Probe、序列为SEQ ID NO.6的PCV2-Probe、序列为SEQ ID NO.9的PCV3-Probe、序列为SEQ ID NO.12的PCV4-Probe。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述探针5’和3’端分别标记有以下荧光基团：PCV1-Probe：CY5和BHQ-2、PCV2-Probe：FAM和BHQ-2、PCV3-Probe：HEX-BHQ1、PCV4-Probe：ROX和BHQ-2。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述Taqman多重荧光定量PCR反应体系为20μ：2X T5 Fast qPCR Mix 10μL、10μM PCV1、3、4上游引物各0.1μL、10μM PCV1、3、4下游引物各0.1μL、10μM PCV2上游引物0.3μL、10μM PCV2下游引物0.3μL、10μM探针各0.02μL、模板DNA 0.5μL、ddH₂O 8.22μL。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述Taqman多重荧光定量PCR反应程序为：95℃5min；95℃10s，61℃50s，共30个循环。

6.猪圆环病毒Taqman多重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，包括以下引物：序列为SEQID NO.1的PCV1-F、序列为SEQ ID NO.4的PCV2-F、序列为SEQ ID NO.7的PCV3-F、序列为SEQID NO.10的PCV4-F、序列为SEQ ID NO.2的PCV1-R、序列为SEQ ID NO.5的PCV2-R、序列为SEQ ID NO.8的PCV3-R、序列为SEQ ID NO.11的PCV4-R。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括以下探针：序列为SEQ IDNO.3的PCV1-Probe、序列为SEQ ID NO.6的PCV2-Probe、序列为SEQ ID NO.9的PCV3-Probe、序列为SEQ ID NO.12的PCV4-Probe。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中所述探针5’和3’端分别标记有以下荧光基团：PCV1-Probe：CY5和BHQ-2、PCV2-Probe：FAM和BHQ-2、PCV3-Probe：HEX-BHQ1、PCV4-Probe：ROX和BHQ-2。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其中所述试剂盒中还包含T5 Fast qPCR Mix。

10.以下引物和探针在制备检测猪圆环病毒的Taqman多重荧光定量PCR试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物和探针为：序列为SEQ ID NO.1的PCV1-F、序列为SEQ ID NO.4的PCV2-F、序列为SEQ ID NO.7的PCV3-F、序列为SEQ ID NO.10的PCV4-F、序列为SEQ ID NO.2的PCV1-R、序列为SEQ ID NO.5的PCV2-R、序列为SEQ ID NO.8的PCV3-R、序列为SEQ IDNO.11的PCV4-R；序列为SEQ ID NO.3的PCV1-Probe、序列为SEQ ID NO.6的PCV2-Probe、序列为SEQ ID NO.9的PCV3-Probe、序列为SEQ ID NO.12的PCV4-Probe；所述探针5’和3’端分别标记有以下荧光基团：PCV1-Probe：CY5和BHQ-2、PCV2-Probe：FAM和BHQ-2、PCV3-Probe：HEX-BHQ1、PCV4-Probe：ROX和BHQ-2。