[发明专利]一种抗GD2抗体、含其的CAR、CAR组合及其应用

说明书

本发明公开了一种抗GD2抗体、含其的CAR、CAR组合及其应用。一种嵌合抗原受体组合，其包含CAR IL13RA2分子、CAR GD2分子和如SEQ ID NO:13所示的LACO融合蛋白，所述CAR IL13RA2分子包含氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的scFv IL13RA2，所述CAR GD2分子包含氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的scFvGD2。本发明提供的CAR组合可增强CAR‑T细胞对IL13RA2高表达的神经胶质瘤细胞系的杀伤能力；且LACO融合蛋白引入到H08 CAR上后可促进H08 CAR‑T的肿瘤清除能力，同时，CAR组合可破坏U87肿瘤细胞的异质性，避免肿瘤的逃逸。

技术领域

本发明属于分子生物学、细胞生物学和免疫肿瘤学领域。本发明涉及一种抗GD2抗体、含其的嵌合抗原受体（CAR）、CAR组合及其应用。

背景技术

恶性神经胶质瘤（malignant gliomas，MG），包括多形性成胶质细胞瘤和胶质母细胞瘤，在美国每年的新增病例有20000例。根据美国脑部肿瘤协会的统计，截至2010年，美国有140000人患有恶性的脑部肿瘤。尽管MG是一种罕见的疾病，但是它的恶性程度以及致死率是非常高的。现有的标准治疗手段，效果非常有限，外科手术以及放疗后的五年生存率也非常低。对于手术后复发的病人，新的治疗选择也非常少。因此，开发新的靶点，新的治疗手段是广大病人的迫切需求。由于肿瘤的异质性，目前本领域面临的主要问题是单一CAR-T无法完全清除病灶内的肿瘤细胞，从而产生免疫逃逸。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种抗GD2抗体、含其的CAR、CAR组合及其应用。尤其是本发明提供（1）靶向IL13RA2与CD40转换受体联用mRNA瞬时表达T细胞治疗神经胶质瘤的应用；（2）靶向IL13RA2与CD40转换受体联用慢病毒稳定表达T细胞治疗神经胶质瘤的应用；（3）靶向IL13RA2与GD2嵌合抗原受体及CD40转换受体联用mRNA瞬时表达T细胞治疗神经胶质瘤的应用。本发明提供的CAR组合可增强CAR-T细胞对IL13RA2高表达的神经胶质瘤细胞系的杀伤能力；且LACO融合蛋白引入到H08 CAR上后可促进H08 CAR-T的肿瘤清除能力，并延长小鼠的生存时长。同时，CAR组合可破坏U87肿瘤细胞的异质性，双向靶向U87，避免肿瘤的逃逸。并且，当LACO融合加入至CAR组合中，这种杀伤作用更加明显，说明LACO融合蛋白同样可以增强T细胞的杀伤功能。LACO融合蛋白及GD2 CAR均能提高IL13RA2 CAR-T对标志物的激活水平以及增强细胞因子的分泌。

本发明一方面提供一种抗GD2抗体，其包含VL^GD2和VH^GD2，所述VL^GD2包含序列如SEQID NO: 1所示的CDR1、序列如SEQ ID NO: 2所示的CDR2和序列如SEQ ID NO: 3所示的CDR3；所述VH ^GD2包含序列如SEQ ID NO: 4所示的CDR1、序列如SEQ ID NO: 5所示的CDR2和序列如SEQ ID NO: 6所示的CDR3。

在某些较佳实施方案中，所述VL^GD2包含如SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列，且所述VH^GD2包含如SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列。

在某些较佳实施方案中，所述抗GD2抗体以scFv形式存在，例如所述scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示，核苷酸序列如SEQ ID NO: 26所示。

本发明另一方面提供一种嵌合抗原受体（CAR），其包含如本发明上述一方面所述的抗GD2抗体、信号肽、铰链区、穿膜区、胞内信号域和/或CD3ζ区域。

较佳地，所述信号肽为CD8信号肽，所述胞内信号域为4-1BB胞内信号域；

更佳地，所述嵌合抗原受体从N末端至C末端依次为：CD8信号肽、抗GD2抗体、CD8铰链区、CD8穿膜区、胞内信号域4-1BB、CD3ζ区域。