[发明专利]一种能够快速检测普鲁兰多糖的基因构建及应用方法

权利要求书

1.一种基因组合物，其特征在于，包括融合蛋白PULLa-CBM1编码基因和融合蛋白CBM1-PULLb编码基因；融合蛋白PULLa-CBM1编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，融合蛋白CBM1-PULLb编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种重组载体组合物，其特征在于，包括含有权利要求1所述融合蛋白PULLa-CBM1编码基因的重组载体和含有权利要求1所述融合蛋白CBM1-PULLb编码基因的重组载体。

3.一种重组菌组合物，其特征在于，包括含有权利要求1所述融合蛋白PULLa-CBM1编码基因的重组菌和含有权利要求1所述融合蛋白CBM1-PULLb编码基因的重组菌。

4.如权利要求3所述的重组菌组合物，其特征在于，包括含有融合蛋白PULLa-CBM1基因的大肠杆菌工程菌和含有融合蛋白CBM1-PULLb编码基因的大肠杆菌工程菌；

含融合蛋白PULLa-CBM1基因的大肠杆菌工程菌的构建方法，包括如下步骤：

（1）合成PULLa-CBM1基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示；

（2）将步骤（1）中制得的PULLa-CBM1基因片段插入pET-20b(+)载体，得到重组质粒pET-20b(+)-PULLa-CBM1；

（3）制备大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，将步骤（2）制得的重组质粒pET-20b(+)-PULLa-CBM1经酶切后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，筛选阳性克隆，即得含融合蛋白PULLa-CBM1的大肠杆菌工程菌；

含融合蛋白CBM1-PULLb基因的大肠杆菌工程菌的构建方法，包括如下步骤：

① 合成CBM1-PULLb基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示；

② 将步骤①中制得的CBM1-PULLb基因片段插入pET-20b(+)载体，得到重组质粒pET-20b(+)-CBM1-PULLb；

③ 制备大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，将步骤②制得的重组质粒pET-20b(+)-CBM1-PULLb经酶切后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，筛选阳性克隆，即得含融合蛋白CBM1-PULLb的大肠杆菌工程菌。

5.如权利要求4所述的重组菌组合物，其特征在于，步骤（3）或步骤 ③ 中筛选阳性克隆的方法为，将转化细胞涂布在含有100μg/mL氨苄霉素的LB固体培养基上，37℃培养，挑取单菌落接种至含有100μg/mL氨苄霉素的LB液体培养基中37℃过夜培养，然后通过PCR验证，得到目的基因条带的阳性克隆子，测序后，保留测序结果正确的菌株作为目的菌株。

6.权例要求4中所述方法构建的含融合蛋白PULLa-CBM1基因的大肠杆菌工程菌在生产融合蛋白PULLa-CBM1中的应用；

所述方法构建的含融合蛋白CBM1-PULLb基因的大肠杆菌工程菌在生产融合蛋白CBM1-PULLb中的应用。