[发明专利]一种能够快速检测β-1，3-葡聚糖的基因构建及应用方法

说明书

本发明提供了一种能够快速检测β‑1，3‑葡聚糖的基因构建及应用方法，提供了一种融合蛋白13GLUCAN1a‑CBM2编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，一种融合蛋白CBM2‑13GLUCAN1b编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述融合蛋白13GLUCAN1a‑CBM2和融合蛋白CBM2‑13GLUCAN1b在检测β‑1，3‑葡聚糖中的应用，本发明提供的融合蛋白13GLUCAN1a‑CBM2和融合蛋白CBM2‑13GLUCAN1b能够与β‑1，3‑葡聚糖特异性结合，并产生荧光，能够用于β‑1，3‑葡聚糖的检测。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种能够快速检测β-1，3-葡聚糖的基因构建及应用方法。

背景技术

β-1，3-葡聚糖是一种重要的生物活性多糖,广泛分布于植物、真菌和细菌中,具有来源广、可再生和安全等优点。β-1，3-葡聚糖独特的结构特征使其具有降胆固醇、调节血糖和提高免疫力等多种特殊生理功能,是一种理想的保健食品,同时可作为食品添加剂用于食品工业领域,具有良好的应用价值和开发前景,目前已成为国内外研究的热点。

中国专利文献CN105842208A(申请号：201610160837.1)公开了一种基于荧光增强原理的β-葡聚糖检测方法，该方法以处理过的硅片为基底，结合旋涂技术将二氧化钛和氧化石墨烯水凝胶沉积在硅片上，制备二氧化钛/氧化石墨烯水凝胶一维光子晶体，并在光子晶体上通过真空蒸镀的方法镀金，制备了镀金的二氧化钛/氧化石墨烯水凝胶一维光子晶体，并以此光子晶体为荧光增强的基底，通过检测β-葡聚糖与苯胺蓝特异性结合的荧光复合产物的荧光强度来检测β-葡聚糖的方法；该方法与本申请提供的检测方法明显不同。

现有技术中关于利用CBM结构域与荧光蛋白融合作为探针检测底物的方法报道较少。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种能够快速检测β-1，3-葡聚糖的基因构建及应用方法。

发明人将基因CBM2的N端通过Linker(连接肽)添加13GLUCAN1基因的a段构建融合蛋白13GLUCAN1a-CBM2，CBM2的C端通过Linker(连接肽)添加13GLUCAN1基因的b段，构建融合蛋白CBM2-13GLUCAN1b。本发明发现两个融合蛋白13GLUCAN1a-CBM2、CBM2-13GLUCAN1b与底物β-1,3-葡聚糖同时发生结合时，能够产生强烈荧光，而融合蛋白13GLUCAN1a-CBM2、CBM2-13GLUCAN1b不与底物结合时，不产生明显荧光，以此可以利用融合蛋白13GLUCAN1a-CBM2、CBM2-13GLUCAN1b检测β-1.3-葡聚糖。

本发明技术方案如下：

一种融合蛋白13GLUCAN1a-CBM2编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种融合蛋白CBM2-13GLUCAN1b编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一种重组载体，包含上述13GLUCAN1a-CBM2编码基因的核苷酸序列，如SEQ IDNO.1所示。

一种重组载体，包含上述CBM2-13GLUCAN1b编码基因的核苷酸序列，如SEQ IDNO.2所示。

一种重组菌，包含上述13GLUCAN1a-CBM2编码基因的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示。

一种重组菌，包含上述CBM2-13GLUCAN1b编码基因的核苷酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

一种含融合蛋白13GLUCAN1a-CBM2基因的大肠杆菌工程菌的构建方法，包括如下步骤：

(1)合成13GLUCAN1a-CBM2基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；