[发明专利]一种快速鉴定细胞种属的检测试剂盒

权利要求书

1.一种种属鉴定的引物组合物，其特征在于，所述的引物组合物选自以下的一种或者几种：

mouse-F：ATTACAGCCGTACTGCTCCTAT，

mouse-R：CCCAAAGAATCAGAACAGATGC，

rat-F：AGACACTCTGACGACTGTCAACA，

rat-R：CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG，

Human-F：GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT，

Human-R：GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC。

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述的引物成对使用；

所述的引物组合物选自以下的一对或者几对：

第一对：mouse-F：ATTACAGCCGTACTGCTCCTAT和mouse-R：CCCAAAGAATCAGAACAGATGC，

第一对：rat-F：AGACACTCTGACGACTGTCAACA和rat-R：CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG，

第一对：uman-F：GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT和Human-R：GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC。

3.权利要求1所述的引物组合物的应用，其特征在于，使用所述的引物组合物扩增待检测细胞的基因组DNA，鉴定待检测细胞的种属来源，或者判断待检测细胞是否存大鼠、小鼠或者人类种属的细胞的种间污染。

4.一种种属鉴定的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有权利要求1的引物组合物。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有Chelex-100。

6.一种鉴定细胞种属的方法，其特征在于，使用权利要求1的引物组合物扩增检测细胞的基因组DNA，根据检测结果鉴定待检测细胞的种属来源。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

S1,获取检测细胞的基因组DNA，

S2,使用权利要求1的引物组合物扩增检测细胞的基因组DNA，

S3,根据检测结果鉴定待检测细胞的种属。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，获取检测细胞的基因组DNA包括以下步骤：

S1.1,消化、漂洗并收集细胞，

S1.2,加入100-300μl、质量体积比为5％的Chelex-100，震荡混匀，

S1.3,加入8-100μl、浓度为20mg/μl蛋白酶K，混匀，45-65℃保温2-5小时，取出后震荡，

S1.4,90-110℃保温5-10分钟,振荡后8000-12000rpm离心2-5分钟,收集上清或者放0-10℃备用。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，PCR反应的步骤包括：

S2.1,将权利要求1所述的引物组合物中的每条引物稀释成终浓度为100nmol/L的储藏液与10nmol/L的工作液，

S2.2,在反应管中按以下组份配制PCR预混液，每个细胞样本配制3种不同的PCR预混液：

PCR Mix，22μl，

Primer Mix，2μl，

S2.3,向以上反应混合液中加入1μl检测样品，使总体积达到25μl，检测样品中检测细胞的基因组DNA浓度为80-200ng/μl，

S2.4,把反应管放入PCR仪中，设定以下条件，进行PCR反应：

其中，检测小鼠细胞使用Tm为58℃、检测大鼠细胞使用Tm为60℃、检测人源细胞使用Tm为62℃。

10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，鉴定待检测细胞的种属的步骤包括：

S3.1,制备琼脂糖凝胶，以便进行电泳，

S3.2，将完成扩增的PCR反应液依次加入到琼脂糖胶的胶孔中，并选择合适的分子量标记，

S3.3,通电进行电泳，保持电压120V，

S3.4,待PCR产物中条带发生分离后，采用凝胶成像系统拍照，

S3.5将PCR产物中条带与阳性对照或者阴性对照的条带比对。