[发明专利]双功能UDP-糖基转移酶及其应用

权利要求书

1.一种UDP-糖基转移酶基因，其特征在于：其核苷酸序列具有如下特征中的一种或二种以上：

1)具有SEQ ID NO.1所示的脱氧核糖核酸序列；

2)编码SEQ ID NO.2氨基酸序列的脱氧核糖核酸序列；

3)对SEQ ID NO.1所示的脱氧核糖核酸序列进行一个或两个以上核苷酸取代和/或缺失和/或添加而得到的编码具有UDP-糖基转移酶活性的脱氧核糖核酸序列；

4)与SEQ ID NO.1限定的脱氧核糖核酸序列的同源性达到80％及以上，且能编码UDP-糖基转移酶的脱氧核糖核酸序列。

2.一种权利要求1所述的UDP-糖基转移酶基因编码的UDP-糖基转移酶，其特征在于：其氨基酸序列具有如下特征中的一种或二种以上：

1)具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

2)具有如SEQ ID NO.2从氨基端开始第1-458位氨基酸残基序列；

3)对SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列进行一个或两个以上氨基酸取代和/或缺失和/或添加而形成的具有UDP-糖基转移酶活性的氨基酸序列；

4)与SEQ ID NO.2具有至少80％同一性的氨基酸序列。

3.一种含有权利要求1所述的UDP-糖基转移酶基因的重组表达质粒。

4.一种含有权利要求1所述的UDP-糖基转移酶基因的重组基因工程菌。

5.一种权利要求2所述的UDP-糖基转移酶的制备方法，其特征在于：将权利要求1所述的UDP-糖基转移酶基因克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的UDP-糖基转移酶。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述的重组表达载体包括大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体、或哺乳动物细胞表达载体中的一种或二种以上；

所述宿主细胞包括大肠杆菌宿主细胞、酵母菌宿主细胞、枯草杆菌宿主细胞、乳酸菌宿主细胞、放线菌宿主细胞、丝状真菌宿主细胞、昆虫细胞，哺乳动物细胞中的一种。

7.一种权利要求2所述的UDP-糖基转移酶在糖基化甜菊醇糖苷或黄酮类化合物的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：糖基化所得甜菊醇糖苷的产物包括甜菊双糖苷D、甜菊双糖苷B、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷G、甜菊苷B、甜菊苷C、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷E2、莱鲍迪苷E3、莱鲍迪苷E4、莱鲍迪苷E6、莱鲍迪苷I、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷AM、莱鲍迪苷D7、莱鲍迪苷M；

糖基化所得黄酮类化合物的产物包括槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-5-O-葡萄糖苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷；

所述莱鲍迪苷E2具有如下结构式：

所述甜菊苷B具有如下结构式：

所述莱鲍迪苷E6具有如下结构式：

9.莱鲍迪苷E2、甜菊苷B、莱鲍迪苷E6在作为甜味剂中的应用。

10.权利要求1所述的核苷酸或编码权利要求2所述蛋白质的核苷酸在甜叶菊遗传育种中的应用，所述核苷酸在甜叶菊中过表达。