[发明专利]一种影响猪肌内脂肪含量性状的分子标记及应用

说明书

本发明公开了一种猪肌内脂肪含量性状相关基因ADIG的分子标记，它是含猪ADIG基因第一内含子的DNA片段，其核苷酸序列如序列表SEQID NO：1(长度为488bp)所示，其中，该分子标记的核苷酸序列的202bp处有一个GA突变位点。本发明利用现有的PCR和测序技术，发现此多态位点与猪肌内脂肪含量性状显著相关，为猪肌内脂肪含量性状的分子标记辅助育种提供了一个新的分子标记，对猪肉质性状的研究有一定帮助。

技术领域

本发明属于家畜分子标记筛选技术领域，具体涉及一种影响猪肌内脂肪含量性状的分子标记及应用。

背景技术

随着社会经济发展和人民生活水平的提高，高品质、多元化、个性化消费需求的优质猪肉市场需求激增，但是当前综合性状优良、特色鲜明、满足中国人口味的猪肉产品不多，猪肉产品市场供需不匹配问题逐渐显现，因此，猪肉品质遗传改良已越来越被重视。肌内脂肪含量(Intramuscular Fat,IMF)是影响肉品质性状的一项重要指标，它与猪肉的嫩度、风味、多汁性存在显著相关(Lu etal.2008)。然而，猪肉质性状较难活体测量，很难用常规育种技术进行遗传改良，因此寻找控制猪肉质性状(尤其是IMF)的关键分子标记，应用于该性状的分子辅助育种，对提高猪肉品质性能具有重要意义。

ADIG(Adipogenin)脂肪生成素是一种全新的基因，仅在脂肪细胞中表达，而不在基质血管细胞群中表达(Kim et al.,2005)。Liu等(2017)通过对牛肌卫星细胞的诱导分化发现，ADIG过表达可以促进转分化并增加肌卫星细胞中的脂肪积累。Zhang等(2021)在对云岭牛背最长肌转录组分析中也发现，ADIG基因在脂肪细胞质膜中特异性表达，可以调节脂肪组织分化和增殖，ADIG基因在体外的过表达会促进脂肪堆积，相反，缺乏ADIG基因则会抑制脂肪生成。而有关猪ADIG基因对脂肪细胞的影响还未见报道。

申请人前期利用RNA-seq技术对比分析了IMF极端个体背最长肌组织基因表达差异，发现ADIG基因显著差异表达。因此，申请人扩增了猪ADIG基因的部分核苷酸序列，利用该序列进行了多态性变异位点的筛选鉴定及与IMF性状的关联分析研究，以期获得与猪IMF性状相关的新分子育种标记。

发明内容

本发明的目的在于扩增猪ADIG基因的第一内含子DNA序列，以寻找该基因序列突变位点多态性，获得一种与猪肌内脂肪含量性状相关的分子标记，并利用该分子标记辅助选择目标性状的猪，提高育种效率。

本发明通过以下技术方案实现：

第一方面，本发明获得了一种猪肌内脂肪含量性状相关基因ADIG的分子标记，它是含猪ADIG基因第一内含子的DNA片段，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1(长度为488bp)所示，其中，该分子标记的核苷酸序列的202bp处有一个GA突变位点。

第二方面，本发明还提供了一种用于获得上述分子标记的引物对，该引物对为：

正向引物：5’-CAGCCTCTGCCCACTCAT-3’(SEQ ID NO：3)，

负向引物：5’-CTGGGACTCTAGGTTAAGAAAT-3’(SEQ ID NO：4)。

第三方面，本发明还提供了一种上述分子标记的获得办法，以硒都黑猪基因组DNA混合池为模板，采用以下引物对：

正向引物：5’-CAGCCTCTGCCCACTCAT-3’

负向引物：5’-CTGGGACTCTAGGTTAAGAAAT-3’

进行PCR扩增，其获得的分子标记为SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2。

SEQ ID NO：2同样是扩增的一个“硒都黑猪”ADIG基因第一内含子的核苷酸序列，序列长度为488bp，但不同于SEQ ID NO：1，其在该序列第202碱基处存在一个AG碱基的替换。