[发明专利]人基因CHD1位点突变和检测CDH1基因的多个位点突变的试剂盒

说明书

本发明公开了人基因CHD1位点突变和检测CDH1基因的多个位点突变的试剂盒，与CDH1阴性参考序列NG_008021.1相比，所述人基因CHD1发生c.2164+66AC位点突变。包括CDH1基因的c.2076TC、c.1937‑13TC、c.2164+66AC和c.2164+17dupA位点突变；采用Sanger测序技术，可用于快速检测遗传性胃癌患者体内CDH1基因的c.2076TC、c.1937‑13TC、c.2164+66AC和c.2164+17dupA位点突变情况。利用本发明完成的检测结果准确，对遗传性胃癌的临床鉴别诊断有重要的参考意义。

本申请是名称为：检测CDH1基因的多个位点突变的引物、方法和试剂盒，申请号为：201911279328.0的分案申请。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测CDH1基因位点突变的引物，采用普通PCR结合Sanger测序技术，可用于快速检测遗传性胃癌患者体内CDH1基因位点的突变情况。

背景技术

中国是胃癌高发国家，全世界42％的胃癌发生在我国，是第三大常见肿瘤(在男性中排在肺癌和肝癌之后，女性排在乳腺癌和肺癌之后)。胃癌人群中大多数为散发病例，约10％的患者表现有家族聚集性，这种聚集性可能与基因有关，也可能是由于共同的生活环境和饮食习惯所致，而HDGC(hereditary diffuse gastric cancer，遗传性弥漫型胃癌)是已知的以胃腺癌为主的癌症综合征，占所有胃癌总数的1-3％。CDH1基因突变是HDGC遗传的主要原因，也是第一个发现的与遗传性胃癌相关的基因。

CDH1是一个抑癌基因，位于16q22.1，由16个外显子组成，长度约105kb，转录mRNA长4.8kb，编码的E-钙粘蛋白(E-cadherin)分子量为120kd。E-cadherin 是一类Ca2+依赖跨膜糖蛋白，由N端信号肽、前肽和成熟蛋白三部分组成，是目前公认的抑癌蛋白和肿瘤转移抑制蛋白，当它表达减少或功能异常时，将导致肿瘤的侵袭和转移。E-钙粘素在弥漫性胃癌中经常表达缺失，但是在其他类型胃癌中并没有这种现象。

至今已发现有150多种CDH1基因的突变类型，遍布CDH1基因的所有外显子。其中70％左右为致病型突变，包括截短突变(truncated mutation)、剪接突变(splicingmutation)、无义突变(nonsense mutation)；30％左右为错义突变 (missense mutation)，其临床意义还有争议。CDH1基因突变率在不同地区、种族的遗传性弥漫型胃癌检出差别很大，提示不同地区胃癌的发病机制可能不同。符合遗传性胃癌诊断标准的家系中，CDH1基因突变携带者一生中患胃癌的概率大约为70％。弥漫性胃癌一旦出现临床症状，大部分已不可治愈，因此遗传性胃癌家系的CDH1基因检测成为必要。其目的是尽可能明确发病原因，并对有发病危险的家族成员提供遗传性检测，以便早期发现突变基因携带者，及时采取干预措施以提高预后。

Sanger测序法是基因检测的主要手段之一，也是基因检测的金标准。通过测序法对CDH1基因突变进行检测可发现CDH1基因已知和未知的全部类型的异常，为遗传性胃癌患者的诊断提供依据。本发明中发现CDH1基因的c.2076TC、 c.1937-13TC、c.2164+66AC和c.2164+17dupA四个位点的突变在中国人群中普遍存在。因此，临床在利用CDH1基因突变辅助诊断遗传性胃癌时需格外谨慎，加以区别。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测CDH1基因的c.2076TC、c.1937-13TC、 c.2164+66AC和c.2164+17dupA位点突变的引物，采用PCR技术，可用于快速检测遗传性胃癌家系成员体内CDH1基因的c.2076TC、c.1937-13TC、 c.2164+66AC和c.2164+17dupA位点的突变情况。所述检测CDH1基因的 c.2076TC、c.1937-13TC、c.2164+66AC和c.2164+17dupA位点突变情况的引物，包括：