[发明专利]一种检测牛结核分枝杆菌的试剂、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测牛结核分枝杆菌的试剂，包括基于CRISPR/Cas12a正反馈循环机制的识别元件、超支化杂交链式反应信号放大反应用试剂和比色分析用试剂；

所述基于CRISPR/Cas12a正反馈循环机制的识别元件包括：gRNA-T、Cas12a蛋白、辅助探针和可切换导向RNA；

所述可切换导向RNA由iDNA-spacer、iDNA-handle和gRNA组装得到；

所述gRNA-T的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述辅助探针为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列经碱基互补配对组成的双链；

所述iDNA-spacer的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述iDNA-handle的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述gRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述超支化杂交链式反应信号放大反应用探针包括H1、SH1、H2、L1、L2和SH2；所述H1、H2、SH1、SH2、L1和L2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示；

所述比色分析用试剂包括氯化血红素、H₂O₂和ABTS。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述iDNA-spacer、iDNA-handle和gRNA的摩尔比为(1.1～1.3)：(1.1～1.3)：1。

3.一种检测牛结核分枝杆菌的试剂盒，包括权利要求1或2所述的试剂。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照；所述阳性对照品包括SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示的核苷酸序列碱基互补配对组成的目标序列。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述gRNA-T的工作液浓度为50nM；所述辅助探针的工作液浓度为500nM；所述可切换导向RNA的工作液浓度为1μM；所述Cas12a蛋白的工作液浓度为1μM。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述H1、SH1、H2、L1、L2或SH2的工作液浓度分别为1μM。