[发明专利]一种6-Me生物碱在抗肿瘤中的应用

说明书

本发明提供一种6‑Me生物碱在抗肿瘤中的应用，涉及抗肿瘤技术领域。该6‑Me生物碱在抗肿瘤中的应用通过6‑Me诱导死亡抑制胰腺癌恶性表型的生物学活性研究、6‑Me激活RI PK1/Caspase进而诱导细胞死亡的关键作用、6‑ME激活RI PK1/GSDME进而诱导细胞焦亡的关键作用、6‑ME对胰腺癌细胞线粒体功能的影响分析、6‑ME通过靶向丙酮酸羧化酶PCB影响草酰乙酸OAA代谢引发ROS依赖的线粒体紊乱的分子机理探讨、6‑ME靶向丙酮酸羧化酶诱导草酰乙酸代谢失衡进而激活ROS/RI PK1依赖的细胞死亡的内在机制探究阐明了博落回这一传统中药的药理学活性提供新的依据，为后续靶向草酰乙酸代谢干预胰腺癌提供了潜在的策略。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤技术领域，具体为一种6-Me生物碱在抗肿瘤中的应用。

背景技术

胰腺癌(Pancreatic cancer)是一种较为常见的消化系统肿瘤，恶性程度极高，易发生转移。通常肝转移、脑转移、骨转移、肺转移都是比较常见的胰腺癌转移类型。胰腺癌半数以上位于胰头，约90％是起源于腺管上皮的导管腺癌(Pancreatic ductaladenocarcinoma)，其发病率和死亡率近年来明显上升。中晚期胰腺癌多已发生扩散转移，手术切除几率不大，即便手术也仅为姑息性的局部切除。临床上对于中晚期胰腺癌的治疗方法主要有放疗、化疗以及中医药治疗，且以中西医结合为治疗原则。以化学合成为基础的抗肿瘤药物在临床上虽已得到广泛的应用，然而其毒副作用仍然是导致化疗后患者生活质量较差的不可忽视的重要因素。因此，从天然药物中寻找新型抗肿瘤活性物质成为抗癌药物研究的重要方向。较多的研究证实生物碱类、萜类、多酚类、有机酸类、多糖类等天然抗肿瘤药物有良好的临床应用价值。

博落回是罂粟科多年生草本植物，分布于东亚、中国南部和西北地区，多年来一直用于治疗肌肉疼痛、伤口发炎和蜜蜂叮咬，博落回已被发现富含多种生物碱，这可能是其发挥作用的主要活性成分，同时，多项研究证实，博落回及其活性提取物具有杀虫、抗菌、抗炎和抗肿瘤的基本特性，因此，研究这些来自博落回的生物碱的潜在药理活性和生物学功能，特别是抗肿瘤作用具有很高的价值，研究表明从博落回中提取的生物碱血根碱、白屈菜红碱和小檗碱具有抗胰腺癌活性，同时，白屈菜红碱也被证明可以通过下调胃癌细胞中的Bcl-xl和Bcl-2来诱导细胞生长停滞和凋亡，而且，最近在宫颈癌细胞中进行的研究表明，源自博落回macleayins A可以通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路来促进细胞凋亡并抑制细胞增殖，此外，另一种博落回的生物碱Ethoxysanguinarinenon通过激活乳腺癌细胞中的AMPK/mTOR轴展现其抗肿瘤特性，这些观察结果表明，从博落回中提取的生物碱可能是有希望用于癌症的天然化合物，然而现有技术中并没有对6-ME诱杀癌细胞具体且详细的应用和证实，没有6-ME通过抑制丙酮酸羧化酶促进草酰乙酸代谢失衡进而诱导ROS依赖的RIPK1的活化的内在机制。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种6-Me生物碱在抗肿瘤中的应用，解决了现有技术中并没有对6-ME诱杀癌细胞具体且详细的应用和证实，没有6-ME通过抑制PCB促进OAA代谢失衡进而诱导ROS依赖的RIPK1的活化的内在机制的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种6-Me诱导死亡抑制胰腺癌恶性表型的生物学活性研究，具体包括以下步骤：

S1测定细胞浓度

将胰腺癌细胞系，即Patu-8988、PANC-1、ASPC-1及CFPAC-1，接种于96孔细胞培养板中，次日，加入浓度梯度6-ME进行处理48hr，按10μL/孔加入CCK-8试剂，37℃孵育2hr，于450nm测定OD值，并绘制细胞活力曲线，计算不同时间点的IC₅₀；

S2测定细胞生长