[发明专利]一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法

权利要求书

1.一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤一、取待测样品自然解冻并于低温下粉碎，准确称取50g样品匀浆后，经干燥研磨过筛得到样品粉末，保存待EA-IRMS分析用；

步骤二、准确称取50g样品匀浆后，加入萃取剂在超声环境下进行萃取，经离心处理后获取上清液，保存待GC-MS/MS和GC-C-IRMS分析用；

步骤三、将100ml上清液以每秒2滴的速度洗脱过氨基亲和固相萃取柱，再以20ml 50％的乙腈溶液淋洗用以除去非目标含氮化合物，最后以每秒1滴的速度加入5ml 1％盐酸水溶液将氨基亲和固相萃取柱上的SEM洗脱下来，获得浓缩SEM；

步骤四、在70℃的0.1mol·L^-1氢氧化钠溶液中加入乙醛溶液，用乙醛溶液与浓缩SEM中的氨基发生羰氨亲核反应并保持20min，随后将0.1mol·L^-1氢氧化钠溶液温度调整为60℃并加入溴甲烷溶液，溴甲烷溶液与浓缩SEM中另外两个酰氨基进一步发生N-烷基化反应并保持30～60min；

步骤五、准确称取待测样品粉末以及多个分析标准品各2mg，并放入到锡囊包裹以进行稳定氮同位素分析并计算稳定氮同位素比值，随后再进行GC-MS/MS及GC-C-IRMS分析测定，稳定氮同位素比值的计算方式为：

δ(‰)＝(R_样品/R_标准品-1)×1000

式中δ为样品的稳定氮同位素，R为¹⁵N/¹⁴N；

步骤六、以δ¹⁵N_硝基呋喃代替δ¹⁵N_外源性SEM，δ¹⁵N_蛋白质代替δ¹⁵N_内源性SEM，

通过以下计算公式计算外源性和内源性SEM的百分比：

步骤七、按照以下公式计算外源性和内源性SEM的含量，外源性SEM含量用C_外源性SEM表示，内源性SEM含量用C_内源性SEM表示：

C_外源性SEM＝％SEM_外源性×C_{生物体内SEM总量}

C_内源性SEM＝％SEM_内源性×C_{生物体内SEM总量}。

2.根据权利要求1所述的一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，其特征在于，所述步骤一的具体步骤为：取待测样品自然解冻并于低温下粉碎，准确称取50g样品匀浆后，置于-80℃真空冷冻箱干燥48h，干燥样品经研磨过200目筛得到样品粉末，保存待EA-IRMS分析用。

3.根据权利要求1所述的一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，其特征在于，所述步骤二的具体萃取条件为：萃取溶剂CH₃CN比例为10％，水浴温度为60℃，超声功率为400Hz。

4.根据权利要求1所述的一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，其特征在于，所述步骤五中稳定氮同位素分析通过EA-IRMS分析仪进行，在C/N模式下对样品连续流动分析，燃烧炉和还原炉温度分别为950℃和600℃，载气流速为230mL·min^-1，以高纯氮气作参比气。

5.根据权利要求1所述的一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，其特征在于，所述步骤五中的GC-MS/MS及GC-C-IRMS分析测定具体条件为：

GC条件：载气为高纯氦气，升温程序为：0～5min，50℃；5～10min，150℃；15～20min，230℃，保持5min；

MS条件：SEM、甲基氨基脲、二甲基氨基脲的质谱监测离子对分别为100.1→100.1，114.4→100.1和129.3→114.5。