[发明专利]一种基于氮同位素GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法

说明书

本发明公开了一种基于氮同位素GC‑IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，涉及水产品检测技术领域。本发明包括待测样品粉末和上清液的制备；向上清液中加入萃取剂萃取浓缩获得浓缩SEM；在70℃的0.1mol·L^‑1氢氧化钠溶液中加入乙醛溶液并保持20min，随后将0.1mol·L^‑1氢氧化钠溶液温度调整为60℃并加入溴甲烷溶液并保持30～60min进行衍生化反应；准确称取待测样品粉末以及多个分析标准品各2mg，并放入到锡囊包裹以进行稳定氮同位素分析并计算稳定氮同位素比值，随后再进行GC‑MS/MS及GC‑C‑IRMS分析测定。本发明首次建立了基于氮同位素GC‑IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法，该方法对开展动物源水产品中硝基呋喃类抗生素滥用监测的研究，保障水产品质量安全有重要意义。

技术领域

本发明属于水产品检测技术领域，特别是涉及一种基于氮同位素 GC-IRMS分析的动物源水产品中SEM源解析方法。

背景技术

氨基脲(Semicarbazide，SEM)是硝基呋喃类物质的代谢产物，在生物体内能够与蛋白质形成稳定的结合物，对人体具有神经毒害和生理毒害作用，也是食品中潜在的致癌和致畸污染物。目前，我国水产养殖中通常以SEM作为动物源水产品中硝基呋喃类抗生素非法使用的检测指标，但根据现有的研究结果发现，除使用硝基呋喃类抗生素会形成外源性SEM外，生物体内各种含氮化合物或组织蛋白的代谢，如次氯酸盐、蛋白质加热或油炸加工等使氨基酸氧化时也会形成内源性SEM。基于此，动物源水产品中内源性SEM的天然存在给硝基呋喃类抗生素的检测造成严重干扰，进而无法准确判断SEM的来源。

目前，关于动物源水产品中SEM检测领域的研究较少，已报道的文献主要采用高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法、免疫学测定方法等手段对 SEM进行检测。并且液相色谱串联质谱分析是检测复杂基质食品中SEM含量的标准方法，该方法能准确检测到0.01μg·kg^-1的极低浓度水平。国内基于动物源水产品中SEM分析测定的研究有：辛少平(高效液相色谱法测定硝基呋喃类药物代谢物及其在对虾体内的代谢[J].食品科学，2014，(24):7.)等以高效液相色谱-紫外法测定4种硝基呋喃类药物代谢物在虾肉组织中残留量，在0.1～50nmol/mL范围内，SEM的线性相关系数为0.9984，检出限为0.75ug/kg；李剑等研究建立了测定水产品中硝基呋喃类代谢物的超高效液相色谱-串联质谱分析方法，准确定量检测水产品中SEM等多种硝基呋喃类代谢物；黄登宇等建立了动物源食品中呋喃西林代谢物间接竞争化学发光酶免疫检测方法，方法的检测范围为0.123～2.398ug/kg，IC₅₀值为0.544ug/kg，相对标准偏差为1.9％～5.3％，该方法具有较高的准确度；舒秀君等(日本沼虾养殖过程中SEM存在特征研究[J].淡水渔业,2020,(3):11-16.)研究了日本沼虾中SEM 的存在形式，结果证明SEM有结合态和游离态两种形态；彭婕等(中华绒螯蟹中内源性SEM的产生途径研究[J].淡水渔业,2019,49(3):108-112)探究了中华绒鳌蟹内源性SEM的产生途径，证实甲壳类水产品中甲壳素、蛋白质及水解氨基酸与SEM的形成密切相关；于慧娟等(液相色谱-串联质谱法测定甲壳类水产品中SEM的含量[J].分析化学，2012，40(10):1530-1535)利用液相色谱串联质谱技术测定甲壳类水产品中中SEM的含量，证实内源性SEM在动物体内普遍存在。目前虽有诸多研究表明动物源水产品中存在内源性SEM，但在判别样品中外源性和内源性SEM来源的方法上仍存在空白。