[发明专利]一种难裂解细菌基因组DNA提取方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种难裂解细菌基因组DNA提取方法。该方法包括：（1）设定压力、高压时间、低压时间和循环参数；（2）将含有难裂解细菌基因组DNA的样本置于裂解缓冲液中，放入能够持续承受压力的装置，根据设定的参数进行高压、低压快速循环；（3）获得裂解的细菌基因组DNA。本发明公开的方法，可以获得高质量的DNA。采用本发明方法提取的DNA还可适用于各种常规分子生物学操作，如酶切、PCR、实时荧光PCR、LAMP、文库构建、Southern杂交、芯片检测、高通量测序等。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种难裂解细菌基因组DNA提取方法。

背景技术

细菌基因组DNA提取是当前分子扩增和检测领域中最基本的实验操作之一，有着很多经典的方法，如匀浆器法、球磨法、反复冻融循环法等，但是这些方法针对诸如蜡样芽孢杆菌这类难裂解细菌的基因组DNA提取无法达到理想的效果。因此，需要一种难裂解细菌基因组DNA提取方法。

蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）属于产芽孢的革兰氏阳性杆菌，广泛分布于各种环境中，由于其芽孢具有抗逆性，可在经过高温处理、脱水干燥等食品杀菌的工艺中存活，同时由于难裂解，因而提取获得的DNA产量较低，以致影响后续实验。

高压循环技术（Pressure cycling technology，简称PCT）利用流体力学的原理，使用快速交替的高压和低压变换促使细胞溶解或裂解达到裂解样品目的，从而提高DNA的获得数量及质量。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于采用常规提取方法获得的蜡样芽孢杆菌等难裂解细菌的基因组DNA的质量不高的问题，提供一种难裂解细菌基因组DNA提取方法。

本发明提供一种难裂解细菌基因组DNA的方法，基于PCT技术改进了难裂解细菌DNA的提取方法，可以获得高质量的DNA，包括以下步骤：

（1）设定压力、高压时间、低压时间和循环参数；

（2）将含有难裂解细菌基因组DNA的样本置于裂解缓冲液中，放入能够持续承受压力的装置，根据设定的参数进行高压、低压快速循环；

（3）获得裂解的细菌基因组DNA；

所述的压力参数为5-35 kpsi，所述的高压时间参数为1-99s，所述的低压时间参数为1-99s，所述的循环参数为1-99。

本发明首次将PCT技术应用于处理蜡样芽孢杆菌，实现了对难裂解细菌基因组DNA的高效提取。

较好的，本发明的方法可以在能够持续承受压力的装置中进行，例如，能够承受压力参数为5-35 kpsi、高压时间为1-99s、低压时间为1-99s、循环参数为1-99的情况。在本发明的一个优选例中，所述的方法在压力室中进行。

本发明的难裂解细菌基因组DNA提取方法中，所述的压力参数可以根据需要裂解的样品进行调整，较好的，所述的压力参数可以采用10-35 kpsi，更好的，所述的压力参数可以采用20-35kpsi。

本发明的难裂解细菌基因组DNA提取方法中，所述的高压时间可以根据压力和需要处理的样本进行调整，较好的，采用3-30s，更好的，高压时间为5-10秒。

本发明的难裂解细菌基因组DNA提取方法中，所述的低压时间可以根据压力和需要处理的样本进行调整，较好的，低压时间为2-20s，更好的，低压时间为5-10秒。

本发明的难裂解细菌基因组DNA提取方法中，所述的循环参数为3-50次。较好的，所述的循环参数为5-20次，更好的，所述的循环参数为10-15次。

本发明方法中，所述的样本为难裂解细菌，其中细菌包括但不限于蜡样芽孢杆菌。