[发明专利]一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法

权利要求书

1.一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）滑石粉取样；

（2）样品稀释：

（3）在增菌液中增菌；

（4）提取基因组DNA，包括但不限于为CTAB法、酸裂解法、碱裂解法以及商业试剂盒法；

（5）以基因组DNA为模板，以能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物，在等温扩增反应体系中进行等温扩增反应，所述等温扩增反应体系包括聚合酶反应缓冲液，Mg²⁺，dNTP，引物组Bst DNA聚合酶、石蜡块中的一种或多种；

（6）扩增结果检测方法包括但不限于电泳检测、浊度检测或显色检测中的一种，通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在金黄色葡萄球菌。

2.根据权利要求1所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述的取样为，每批滑石粉应随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于10g。

3.根据权利要求1所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述的样品稀释为称取10.0g试样，放入装入90mL稀释剂和玻璃珠的容器中，混匀制成1：10稀释液，所述的稀释剂为氯化钠-蛋白胨缓冲液。

4.根据权利要求3所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，氯化钠-蛋白胨缓冲液的配方为：蛋白胨20g、氯化钠5g和蒸馏水1000mL，将各组分加热溶解后，调pH值为7.0-7.2，在121℃高压灭菌15min。

5.根据权利要求1所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述的增菌为取上述1：10稀释液10mL放入装有增菌液的容器中，36℃±1℃培养18-24小时，其中，所述增菌液为细菌培养液。

6.根据权利要求1所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述的细菌培养液包括：7.5%氯化钠肉汤、10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、NB培养液、LB培养液。

7.根据权利要求6所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述的7.5%氯化钠肉汤的配方为：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠75g、蒸馏水1000mL，将各组分加热溶解后，调pH值为7.2-7.4，在121℃高压灭菌15min。

8.根据权利要求1所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述等温扩增反应体系为：1× Bst DNA聚合酶反应缓冲液，2-9mmol/L Mg²⁺（MgSO₄或MgCl₂），1.0-1.6mmol/L dNTP， 0.15-0.3µmol/L的F3和B3引物，0.8-2.0µmol/L的FIP和BIP引物，0.16-0.64U/μL Bst DNA聚合酶、0-1.5mol/L甜菜碱，在25µL的核酸扩增反应体系中石蜡块融化后的体积为8µl优化体系。

9.根据权利要求1或8所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述的能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组为：

F3：5’- TAAAGCCACATCCAATATAG -3’ （SEQ ID NO：1）；

B3：5’- TGCCTTACATTGATGCTG -3’ （SEQ ID NO：2）；

FIP：5’- GTCGTTGGTGAGCAATTGAGGAGTATCGTTCCAGATTTGTGA -3’； （SEQ ID NO：3）；

BIP：5’- CGACTAGGGGTAGTAATCATTGGCCACTTTGCTATGGAACGTAAC -3’ （SEQ ID NO：4）。

10.根据权利要求1所述的滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述等温扩增反应的反应程序为①65℃孵育60min；②80℃终止反应5min。