[发明专利]一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法

说明书

本发明公开了一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，包括取样；样品稀释：在增菌液中增菌；提取基因组DNA，包括但不限于为CTAB法、酸裂解法、碱裂解法以及商业试剂盒法；以基因组DNA为模板，以能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物，在等温扩增反应体系中进行反应，所述等温扩增反应体系包括聚合酶反应缓冲液，Mg²⁺，dNTP，引物组Bst DNA聚合酶和甜菜碱中的一种或多种；扩增结果检测方法包括但不限于电泳检测、浊度检测或显色检测中的一种，通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在金黄色葡萄球菌。本发明方法具有良好的金黄色葡萄球菌菌株特异性，操作简便、检测时间短、效果极佳，非常适于化工、建材等领域推广使用。

技术领域

本发明属于生物化工领域，具体涉及一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法。

背景技术

滑石粉是一种工业产品，为硅酸镁盐类矿物滑石族滑石，主要成分为含水硅酸镁，经粉碎后，用盐酸处理，水洗，干燥而成，常用于食品、医药、化妆品、橡胶、塑料、油漆等多个行业。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）隶属于葡萄球菌属，菌体球形，是一种革兰氏阳性细菌，可引起人类化脓感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等疾病。同时其产生的肠毒素可污染食物而致食物中毒，是评价食品等质量标准的必检项目之一。包括金黄色葡萄球菌在内的微生物检验也是滑石粉质量评价的重要内容。虽然有针对食品金黄色葡萄球菌的快速检测方法，但目前对于滑石粉中金黄色葡萄球菌的检测操作繁琐，用时长（至少需要3天，如JC/T 542），因此，需要一种能够对滑石粉金黄色葡萄球菌快速检测的方法。

本发明提供了一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，能够对滑石粉这一重要工业产品中的金黄色葡萄球菌进行快速检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有滑石粉金黄色葡萄球菌检测操作繁琐、用时长的问题，提供一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法。

本发明基于环介导等温扩增反应原理来实现优化效果，提供了采用本发明的方法进行检测，具有方便、快速的优点。

本发明提供一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）取样；

（2）样品稀释：

（3）在增菌液中增菌；

（4）提取基因组DNA；

（5）以基因组DNA为模板，以能扩增金黄色葡萄球菌基因组特异性碱基序列的引物组为引物，在等温扩增反应体系中进行反应；

（6）通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在金黄色葡萄球菌。

本发明提供一种滑石粉金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于，所述的取样为，每批滑石粉应随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于10g。

本发明方法中，所述的样品稀释为称取10.0g试样，放入装入90mL稀释剂和玻璃珠的容器中，混匀制成1：10稀释液。

本发明方法中，所述的稀释剂为氯化钠-蛋白胨缓冲液。其中氯化钠-蛋白胨缓冲液的配方为，蛋白胨20g、氯化钠5g和蒸馏水1000mL，将上述成分加热融解后，调pH值为7.0-7.2，在121^oC高压灭菌15min。

本发明方法中，所述的增菌为取上述1：10稀释液10mL放入装有增菌液的容器中，36^oC±1 ^oC培养18-24小时。所述增菌液为细菌培养液，如7.5%氯化钠肉汤、10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、NB培养液、LB培养液等，优选7.5%氯化钠肉汤。7.5%氯化钠肉汤的配方为，蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠75g、蒸馏水1000mL，将上述成分加热溶解后，调pH值为7.2-7.4，在121^oC高压灭菌15min。