[发明专利]一种高效表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的工程菌及应用

权利要求书

1.一种高效表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的工程菌，其特征在于，所述工程菌的底盘菌株中包含重组表达载体和共表达载体；

所述重组表达载体包含表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的基因和组成型启动子HCE基因；所述D-阿洛酮糖3-差向异构酶是具有SEQ NO：1所示氨基酸序列的蛋白质；所述组成型启动子HCE是具有SEQ NO：2所示核苷酸序列的DNA片段；

所述共表达载体包含分子伴侣蛋白的基因，所述分子伴侣蛋白包括dnaJ、dnaK、GroEL和grpE；

所述dnaJ基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；

所述dnaK基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示；

所述GroEL基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.5所示；

所述grpE基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.6所示；

将dnaJ、dnaK、GroEL和grpE的基因序列按照dnaJ-dnaK-GroEL-grpE或dnaJ-dnaK-grpE-GroEL的顺序进行全合成，将全合成的序列插入到载体的多克隆位点，构建成共表达载体。

2.根据权利要求1所述的一种高效表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的工程菌的构建方法，其特征在于，将权利要求1所述的重组表达载体和共表达载体转入底盘菌株中，得到工程菌。

3.根据权利要求1所述的一种高效表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的工程菌的应用，其特征在于，用于胞内生产D-阿洛酮糖3-差向异构酶，催化D-果糖生产D-阿洛酮糖。

4.一种制备D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将权利要求1所述工程菌接种至发酵培养基中进行发酵培养；

2)在发酵培养基中添加诱导剂进行诱导表达，得到发酵液；

3)分离发酵液，获得菌体，加入缓冲液重悬，得到菌液；

4)向D-果糖溶液中加入菌液进行生物转化，得到D-阿洛酮糖。