[发明专利]用于烟草缺锌营养诊断的基因标志物集及其应用

权利要求书

1.一种用于烟草缺锌营养诊断的基因标志物集，其特征在于：所述基因标志物集由Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020组成，Nitab4.5_0000143g0340的核苷酸序列如SEQID NO:1所示，Nitab4.5_0000572g0110的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，Nitab4.5_0003605g0060的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，Nitab4.5_0001724g0060的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，Nitab4.5_0006169g0020的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

2.如权利要求1所述的基因标志物集在烟草缺锌营养诊断中的应用。

3.一种烟草缺锌营养诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括通过RT-qPCR技术检测权利要求1所述的基因标志物集的试剂。

4.根据权利要求3所述的烟草缺锌营养诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括特异性检测Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020的引物。

5.根据权利要求4所述的烟草缺锌营养诊断试剂盒，其特征在于：所述特异性检测Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020的引物的序列如下：

Nitab4.5_0000143g0340的特异性引物：

RT-0143-F: 5ʹ-CGGCTTGTTACACCTCATTACTC-3ʹ，

RT-0143-R: 5ʹ-TTCACCACTTGCTTCAACTCTTC-3ʹ；

Nitab4.5_0000572g0110的特异性引物：

RT-0572-F: 5ʹ-GATAGACCTCTTGCTTCC-3ʹ，

RT-0572-R: 5ʹ-GATTAGTTGCTTGTGATGG-3ʹ；

Nitab4.5_0003605g0060的特异性引物：

RT-3605-F: 5ʹ-TTCAGCAAGAGTAATTGTTG-3ʹ，

RT-3605-R: 5ʹ- ATTCGGAAGTTCGTCAAG-3ʹ；

Nitab4.5_0001724g0060的特异性引物：

RT-1724-F: 5ʹ-GCTTCAGTCATTCCTTAG-3ʹ，

RT-1724-R: 5ʹ-TGCTGTCAATATCATCCT-3ʹ；

Nitab4.5_0006169g0020的特异性引物：

RT-6169-F: 5ʹ-TCTCACTTACAACTCCAG-3ʹ，

RT-6169-R: 5ʹ- AATACTCCTTCCACAATGA-3ʹ。

6.如权利要求3所述的烟草缺锌营养诊断试剂盒在烟草缺锌营养诊断中的应用。

7.一种烟草缺锌营养诊断的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）采集待测烟草叶片，提取总RNA，反转录成cDNA；

2）以反转录得到的cDNA为模板，利用权利要求5中所述的特异性引物进行RT-qPCR检测，根据基因是否上调表达判断待测烟草是否处于缺锌胁迫。

8.根据权利要求7所述的烟草缺锌营养诊断的方法，其特征在于：若待测烟草中Nitab4.5_0000143g0340、Nitab4.5_0000572g0110、Nitab4.5_0003605g0060、Nitab4.5_0001724g0060、Nitab4.5_0006169g0020的表达较正常烟草显著上调，则该待测烟草处于缺锌胁迫状态。