[发明专利]一种高效获取多种生物活性功能因子的鼻黏膜外胚层间充质干细胞三维培养方法

权利要求书

1.一种鼻黏膜外胚层间充质干细胞培养基，其特征在于，所述培养基的组成为基础培养基、抗生素、缓冲剂和添加剂；

所述基础培养基为高糖DMEM和F12；所述抗生素为青霉素和链霉素；所述缓冲剂为HEPES；所述添加剂为透明质酸、干细胞生长因子、抗氧化剂和/或细胞代谢营养物质。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述干细胞生长因子包括EGF、bFGF，所述抗氧化剂包括维生素C、还原型谷胱甘肽，所述细胞代谢营养物质包括丙酮酸、谷氨酰胺、非必需氨基酸。

3.根据权利要求1或2所述培养基，其特征在于，所述添加剂为2-10mg/ml透明质酸、10-50ng/ml EGF、5-20ng/ml bFGF、100-500μg/ml维生素C、50-200μg/ml还原型谷胱甘肽、1-5mM/L丙酮酸、1-5mM/L谷氨酰胺和/或1-5mM/L非必需氨基酸。

4.一种间充质干细胞培养的方法，其特征在于，所述方法为将间充质干细胞接种于含有权利要求1～3任一所述培养基的培养瓶中进行悬浮培养，每天向培养基中加入添加剂，3～7天更换一次培养基，当细胞成团且细胞团直径为0.5～1.5mm时，进行细胞传代。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述悬浮培养的条件为水平往复运动，运动频率为5-10次/分钟，振幅为5-10cm。

6.一种制备多功能生物活性物质的方法，其特征在于，所述方法为将间充质干细胞接种于含有权利要求1～3任一所述培养基的培养瓶中进行悬浮培养，每天向培养基中加入添加剂，3～7天更换一次培养基，当细胞成团且细胞团直径为0.5～1.5mm时，收集培养基，将培养基进行透析纯化，收集透析袋中的物质，并进行冷冻干燥得多功能生物活性物质。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述透析袋的截留分子量为4800～5100。

8.一种多功能组织工程复合皮肤贴膜，其特征在于，所述多功能组织工程复合皮肤贴膜中含有纤维蛋白、凝血酶、壳聚糖、京尼平、透明质酸、TG、抑肽酶、多功能生物活性物质。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，将纤维蛋白、凝血酶、壳聚糖、京尼平、透明质酸、TG、抑肽酶和多功能生物活性物质混合，于35～38℃交联反应10～14h。

10.权利要求1～3任一所述培养基，或权利要求4或5所述间充质干细胞培养的方法，或权利要求6或7所述制备多功能生物活性物质的方法，或权利要求8或9所述多功能组织工程复合皮肤贴膜在医药、日化用品领域中的应用。