[发明专利]一种快速检测人外周血Her2基因扩增的方法

权利要求书

1.一种快速检测人外周血Her2基因扩增的方法，其特征在于：包括以下几个步骤：

1）特异性gRNA序列设计合成及荧光标记：靶向人Her2基因及内参LAF4基因设计并合成特异性gRNA序列，Her2 gRNA和LAF4 gRNA标记不同颜色的荧光；

2）dcas9蛋白定量：将dcas9蛋白浓度稀释到50mg/ml；

3）探针体系构建：dcas9与Her2 gRNA按照1:10体积比进行混合组成第一组探针，dcas9与LAF4 gRNA按照1:10体积比进行混合组成第二组探针；

4）PCR扩增目的基因：通过PCR方法扩增人外周血循环肿瘤DNA样本中的Her2和LAF4基因，并将PCR扩增产物作为后续检测样本；

5）酶标仪检测：将步骤4）中所述的检测样本，加入步骤3）所述的探针体系中混合反应，然后经过DNA回收柱进行回收，洗涤，洗脱，再将洗脱物置于酶标仪中进行荧光值的测定，通过对荧光值的比对，判定检测结果，当Her2/ LAF4信号比2.2，则可以判定为阳性结果。

2.如权利要求1所述的一种快速检测人外周血Her2基因扩增的方法，其特征在于：所述步骤1）中Her2基因及内参LAF4基因的特异性sgRNA序列为：

Her2基因gRNA序列：如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，

LAF4基因gRNA序列：如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的一种快速检测人外周血Her2基因扩增的方法，其特征在于：所述步骤3）中探针体系的PH调整为4-5之间。

4.如权利要求1所述的一种快速检测人外周血Her2基因扩增的方法，其特征在于：所述步骤5）中的检测样本加入所述步骤3）的探针体系的混合条件为37℃温度下混合反应30min。

5.如权利要求1-4任一所述的一种快速检测人外周血Her2基因扩增的方法，其特征在于：所述方法在快速检测人外周血Her2基因扩增试剂盒中的应用。