[发明专利]重组慢病毒载体和293T-CD3细胞系及其构建方法与应用在审

专利信息
申请号: 202210779278.8 申请日: 2022-07-01
公开(公告)号: CN115948470A 公开(公告)日: 2023-04-11
发明(设计)人: 蒋栋;谢兴旺;史云强;王雪艳;王江华;王淼 申请(专利权)人: 北京可瑞生物科技有限公司
主分类号: C12N15/867 分类号: C12N15/867;C12N15/65;C12N15/12;C12N5/10;G01N33/569;C12Q1/70;C12Q1/06;C12R1/91;C12R1/93
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人: 孙怡
地址: 102200 北京市昌平区*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 重组 病毒 载体 293 cd3 细胞系 及其 构建 方法 应用
【权利要求书】:

1.重组慢病毒载体,其特征在于,所述重组慢病毒载体包含CD3D的编码核酸分子、CD3G的编码核酸分子、CD3E的编码核酸分子和CD247的编码核酸分子;其中,各编码核酸分子间以2A肽编码核酸分子相连;且CD3D的编码核酸分子、CD3G的编码核酸分子、CD3E的编码核酸分子和CD247的编码核酸分子位于同一表达盒内。

2.根据权利要求1所述的重组慢病毒载体,其特征在于,所述表达盒还包含抗性基因;

优选地,所述抗性基因位于所述表达盒的3’端;和/或

所述抗性基因为真核抗性基因;

更优选地,所述真核抗性基因为潮霉素抗性基因、杀稻瘟菌素S抗性基因、嘌呤霉素抗性基因、遗传霉素抗性基因或腐草霉素D1抗性基因。

3.根据权利要求1或2所述的重组慢病毒载体,其特征在于,所述2A肽编码核酸分子选自F2A的编码核酸分子、T2A的编码核酸分子、E2A的编码核酸分子和P2A的编码核酸分子中的至少一种;和/或

CD3D的编码核酸分子、CD3G的编码核酸分子、CD3E的编码核酸分子和CD247的编码核酸分子从5’端到3’端按顺序依次连接;和/或

CD3D、CD3G、CD3E和CD247的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1-4所示;

优选地,所述表达盒包含编码CD3D-F2A-CD3G-T2A-CD3E-E2A-CD247的核酸分子;

更优选地,所述表达盒包含如SEQ ID NO.5所示的核酸分子;和/或

所述表达盒包含编码CD3D-F2A-CD3G-T2A-CD3E-E2A-CD247-P2A-HygR的核酸分子。

4.根据权利要求1-3任一项所述的重组慢病毒载体,其特征在于,所述表达盒由真核启动子驱动;所述真核启动子优选为EF-1α、CMV、SV40或PGK1;和/或

所述表达盒的终止子为TGA、TAG或TAA。

5.293T-CD3细胞系,其特征在于,其保藏编号为CGMCC NO.45185。

6.293T-CD3细胞系,其特征在于,所述293T-CD3细胞系含有权利要求1-4任一项所述的重组慢病毒载体,且所述293T-CD3细胞系能够表达CD3蛋白。

7.293T-CD3细胞系的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括:将权利要求1-4任一项所述的重组慢病毒载体和慢病毒包装载体转染293T细胞,获得包装的慢病毒颗粒,然后用所述慢病毒颗粒转染293T细胞。

8.权利要求5或6所述的293T-CD3细胞系或按照权利要求7所述的构建方法获得的293T-CD3细胞系在测定表达TCR的慢病毒的病毒滴度中的应用。

9.一种测定表达TCR的慢病毒的滴度的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)使表达TCR的慢病毒感染权利要求5或6所述的293T-CD3细胞系或权利要求7所述的构建方法获得的293T-CD3细胞系;

(2)用抗CD3的抗体对感染的293T-CD3细胞进行染色,并检测细胞阳性率;

(3)通过细胞阳性率计算所述表达TCR的慢病毒的滴度。

10.用于测定表达TCR的慢病毒的滴度的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含权利要求5或6所述293T-CD3细胞系或权利要求7所述的构建方法获得的293T-CD3细胞系。

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