[发明专利]一种异环磷酰胺原料药中异环磷酰胺、杂质E、杂质G的检测方法

权利要求书

1.一种异环磷酰胺原料药中异环磷酰胺、杂质E、杂质G的检测方法，其特征在于：所述检测方法是采用液相色谱-质谱联用法进行检测，所述异环磷酰胺、杂质E、杂质G结构分别如式I、II、III所示：

（I）、（II）、（III），所述异环磷酰胺的检测限为0.005μg/mL，杂质E的检测限为0.125μg/mL，杂质G的检测限为0.002μg/mL。

2.根据权利要求1所述的一种异环磷酰胺原料药中异环磷酰胺、杂质E、杂质G的检测方法，其特征在于：所述检测步骤如下：

（1）溶液的配制：包括空白溶液、对照品储备液、对照品溶液、供试品储备液、供试品溶液，其中：

空白溶液：5%甲醇水溶液，作为稀释剂；

对照品储备液：精密称定异环磷酰胺、杂质E、杂质G对照品，分别置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度均为1.0mg/mL的异环磷酰胺、杂质E、杂质G对照品储备液；

对照品溶液：精密量取异环磷酰胺、杂质E、杂质G对照品储备液，置于100mL棕色容量瓶中，用稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为1ng/mL的异环磷酰胺、浓度为1ng/mL杂质E、浓度为0.01ng/mL杂质G对照品溶液；

供试品储备液：取异环磷酰胺原料药，精密称定，置于10mL棕色容量瓶中，用稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为1.0mg/mL供试品储备液；

供试品溶液：精密量取供试品储备液，置于100mL棕色容量瓶中，用稀释剂稀释定容至刻度，摇匀制得浓度为40ng/mL供试品溶液；

（2）采用液相色谱-质谱联用法对所述的空白溶液、供试品溶液、对照品溶液进行检测，所述液相色谱条件为：采用T3色谱柱，以5mM碳酸氢铵水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱，所述的梯度洗脱的程序如下：0min→1.5min，5%流动相A，95%流动相B；1.5min→8.5min，5%流动相A→55%流动相A，95%流动相B→45%流动相B；8.5min→8.6min，55%流动相A→5%流动相A，5%流动相B→95%流动相B；8.6min→10min，55%流动相A→5%流动相A，5%流动相B→95%流动相B。

3.根据权利要求2所述的一种异环磷酰胺原料药中异环磷酰胺、杂质E、杂质G的检测方法，其特征在于：所述的色谱柱的型号为ACQUITY UPLC® HSS T3，规格为1.8µm×100mm×2.1mm，流速为0.2mL/min-0.3mL/min，柱温为30℃-40℃，进样体积为10μL。

4.根据权利要求2所述的一种异环磷酰胺原料药中异环磷酰胺、杂质E、杂质G的检测方法，其特征在于：所述质谱采用ESI离子源，正离子模式下以多反应监测方式（MRM）进行定量分析，所述的异环磷酰胺的定量离子为：母离子为260.75m/z，子离子为91.74m/z，碰撞能为24eV；杂质E的定量离子为：母离子为155.48m/z，子离子为62.72m/z，碰撞能为16eV；杂质G的定量离子为：母离子为274.72m/z，子离子为199.82m/z，碰撞能为10eV。

5.根据权利要求4所述的一种异环磷酰胺原料药中异环磷酰胺、杂质E、杂质G的检测方法，其特征在于：所述质谱的离子源参数为：电喷雾电压IS为5500V，毛细管电压为3.2kV，脱溶剂气流速为700L/h，锥孔气流速为150L/h，碰撞气为氩气，碰撞气流速为0.13mL/min，离子源温度TEM为150℃，脱溶剂气温度为350℃。