[发明专利]新型人精子冷冻保护剂制备方法

说明书

本发明公开了新型人精子冷冻保护剂制备方法，包括以下步骤：S1制备GEYC冷冻保护剂；S2向GEYC冷冻保护剂中加入7水硫酸锌，得到该新型人精子冷冻保护剂，本发明适用于精子冷冻复苏技术领域，以硫酸锌为材料添加入现有人精子冷冻保护添加剂(甘油‑卵黄‑林檬酸盐冷冻保护添加剂，GEYC)，得到新型人精子冷冻保护剂(Zn‑GEYC)。与常规的GEYC相比的，Zn‑GEYC可能改善抗精子线粒体结构和功能，提升精子糖代谢能力，改善精子冷冻损伤，提高冷冻复苏后精子活力，增高冷冻复苏后精子活动的平均经线速率，增加现有人精子冷冻复苏率。

技术领域

本发明属于精子冷冻复苏技术领域，具体是新型人精子冷冻保护剂制备方法。

背景技术

精子冷冻复苏方法为：

根据WHO《人类精液检查与处理实验室手册》第5版的推荐方法，采用GEYC为冷冻保护液，使用程控冷冻仪进行慢速降温和冷冻：冷冻保护剂以1:1的量加入精液中，30-35℃孵育5min，从20℃到-6℃，降温1.5℃/min；然后6℃/min至-100℃；持续30min，转移入液氮中。液氮中冷冻2周后，37℃水浴中快速复温。

然而，精子冷冻复苏过程受多种因素影响：渗透压改变、冷冻休克损伤、细胞内外冰晶形成、冷冻保护剂毒性等，均会引起精子质量下降：降低总活动精子百分数、运动参数也下降明显，因此，提高冷冻复苏后精子活力，改善患者精子冷冻复苏率，仍是目前生殖领域的重要临床需求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供新型人精子冷冻保护剂制备方法。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

新型人精子冷冻保护剂制备方法，包括以下步骤：

S1制备GEYC冷冻保护剂；

S2向GEYC冷冻保护剂中加入7水硫酸锌，得到该新型人精子冷冻保护剂。

优选的，所述步骤S1中，制备GEYC冷冻保护剂，包括以下步骤：

S11在枸橼酸二水中加适量无菌蒸馏水，得到3％枸橼酸钠；

S12量取39mL3％枸橼酸钠放入反应容器中，加入1.5g氨基乙酸，加入39mL5％葡萄糖注射液和15ml甘油，充分混匀、溶解、过滤后，加入20ml新鲜卵黄，得到保护剂粗品；

S13将保护剂粗水浴搅拌，控制pH值在7.2～7.4范围内，细菌检测和精子毒性检测均合格后，得到该新型人精子冷冻保护剂，分装保存。

优选的，所述步骤S11中，称量3.418g枸橼酸二水，加无菌蒸馏水至100mL，得到3％枸橼酸钠。

优选的，所述步骤S12中，过滤设备为0.22μm微孔滤器。

优选的，所述步骤S12中，新鲜卵黄提取方法为：选用SPF级鸡蛋3个～5个，清洗鸡蛋后，用75％酒精消毒蛋壳，保持卵黄完整的前提下，留取卵黄，去除蛋清，选用10mL灭菌注射器刺破卵黄膜，吸取卵黄。

优选的，所述步骤S13中，水浴温度为56℃，时间为40min。

优选的，所述步骤S13中，分装包括：

在超净台内，将新型人精子冷冻保护剂以2mL/管分装于玻璃瓶内。

优选的，所述步骤S13中，保存温度为-70℃，避免反复冻融，且使用时间不超过3个月。

优选的，所述步骤S13中，所述7水硫酸锌加入量为1.435*10^-7g。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：