[发明专利]一种千金藤素的提取制备方法

说明书

本发明提供一种采用山乌龟提取制备千金藤素的方法，包括原料提取、萃取、硅胶柱层析、重结晶四个步骤，工艺步骤少，生产周期较短，操作简单，成本低，易于放大生产。

技术领域

本发明涉及一种天然产物的提取方法，具体涉及一种从山乌龟中提取制备千金藤素的方法，属于天然产物提取领域。

背景技术

山乌龟为防己科千金藤属StephaniaLour植物的块根，此块根硕大露于地面，故名山乌龟，主产于长江流域及以南各地，为民间常用药。其中一种山乌龟((Stephaniaepigaea)主用于提升白细胞、清热解毒、消炎止痛、毒蛇咬伤、无名肿毒等作用。其主要药用成分千金藤素(Cepharanthine)含量较高，用于肿瘤病人放射治疗或因苯等有机溶剂引起的白细胞减少，已取得良好效果。CN113046327A公开千金藤素在抗新冠病毒SARS COV 2方面表现出异常强的活性，因此具有广阔的应用前景。

千金藤素的分子结构式如下：

为更好地开发、利用山乌龟的药用价值，提高千金藤素的产量，降低千金藤素的生产成本，还需要深入研究千金藤素的提取制备技术。发明人长期研究千金藤素提取制备方法，在大量的试验研究中发现了千金藤素一种简便高效的提取制备方法，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用山乌龟提取千金藤素的方法，通过酸化的乙醇-水溶液提取-萃取-硅胶柱层析-重结晶的简单工艺制备得到克级至公斤级的千金藤素。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

提供一种采用山乌龟提取制备千金藤素的方法，包括如下步骤：

(1)原料提取：将山乌龟药材粉碎，加入10-40％酸性乙醇-水溶液回流提取2-3次，过滤并合并滤液，减压蒸馏除去乙醇后，采用大孔树脂富集，用醇溶液进行洗脱，收集醇洗液并浓缩得到原料提取液；

(2)萃取：取原料提取液，加水稀释后量取等体积乙酸乙酯萃取1-3次，弃乙酸乙酯层，水层用氢氧化钠调节pH至8-9，再加入等体积乙酸乙酯萃取2-3次，合并乙酸乙酯层并浓缩备用；

(3)硅胶柱层析：取浓缩后的乙酸乙酯萃取液，加入硅胶均匀拌样、烘干后，将样品加入硅胶柱层析中，用石油醚-乙酸乙酯-氨水体系梯度洗脱，通过薄层色谱进行监控，收集千金藤素流份，浓缩得到千金藤素粗品；

(4)重结晶：将层析得到的千金藤素粗品，分别加入乙醇加热溶解，放置结晶，得到的晶体重复本步骤操作2-3次得结晶的千金藤素。

在一实施方案中，步骤(1)中，回流提取时10-40％酸性乙醇-水溶液中所采用的酸的质量浓度为0.5％，10-40％酸性乙醇-水溶液的加入量为山乌龟药材质量的6-8倍。

在一实施方案中，步骤(1)中，所述10-40％酸性乙醇-水溶液为盐酸或硫酸。

在一实施方案中，步骤(1)中，所述大孔树脂为D101或AB-8。

在一实施方案中，步骤(1)中，所述醇溶液为60％-90％甲醇或乙醇。

在一实施方案中，步骤(3)中，所述硅胶柱层析装柱料为100-200目硅胶。

在一实施方案中，步骤(3)中，拌样硅胶与装柱硅胶比例为1:3或1:5。

在一实施方案中，步骤(3)中，所述氨水为0.1-0.2％氨水，由0.1-0.2体积份25％浓氨水与100体积份水配制而成；所述薄层色谱的薄层展开剂为6.8:3.2:1的正己烷/乙酸乙酯/甲醇，所述薄层色谱的显色剂为改良碘化铋钾。

本发明千金藤素含量的HPLC检测方法如下：

一、色谱条件：