[发明专利]全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法

权利要求书

1.一种全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一，蛋白裂解：基于自动化处理工作站，将全类型生物样本与蛋白裂解液按照100μL～500μL的体系进行充分混合，裂解提取蛋白，其中，所述蛋白裂解液为0.1～10％脱氧胆酸钠；

步骤二，还原烷基化：加入终浓度为10-1000mM的还原烷基化试剂，打开蛋白结构中二硫键并与蛋白游离巯基结合，暴露出尽可能多的酶切位点；

步骤三，蛋白酶解：根据样品蛋白量与蛋白酶质量比1：5～10的比例混合，将蛋白酶解成多个小的肽段；

步骤四，肽段脱盐：将酶解后的肽段-酸性终止液溶液，转移至填充有具有阳离子交换作用的固相萃取板，加入质量分数为1％的三氟乙酸异丙醇溶液和加入质量分数为0.2％的三氟乙酸溶液进行脱盐洗涤，最后加入碱性乙腈溶液洗脱，收集含有肽段的洗脱液，以得到进行质谱检测进样的样品；

步骤五，冻干复溶：滤液冻干复溶后，待质谱检测分析。

2.根据权利要求1所述的全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法，其特征在于，所述步骤二中，所述还原烷基化试剂为三(2-羧乙基)膦盐酸盐、氯乙酰胺。

3.根据权利要求1所述的全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法，其特征在于，所述步骤三中，所述蛋白酶为胰蛋白酶和赖氨酸酶。

4.根据权利要求1所述的全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法，其特征在于，所述步骤一中，蛋白裂解的时间为5分钟；所述步骤二中，还原烷基化的时间为30分钟；所述步骤三中，蛋白酶解的时间为120分钟；所述步骤四中，肽段脱盐的时间为30分钟；所述步骤五中，冻干复溶的时间为40分钟。

5.根据权利要求1所述的全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法，其特征在于，所述步骤一包括：

自动移取生物样本10μL置于0.5mL 96孔板中并放置在1号位的恒温混匀摇床上，再从7号位的12道槽第1列中吸取90μL 0.1％脱氧胆酸钠分别加入1号位的恒温混匀摇床上的0.5mL 96孔板中，1000rpm转速涡旋混匀，提取蛋白。

6.根据权利要求1所述的全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法，其特征在于，所述步骤二包括：从6号位的低温盘第1列中吸取10μL 0.5M氯乙酰胺和三(2-羧乙基)膦盐酸盐的混合物，分别加入1号位的恒温混匀摇床上的0.5mL 96孔板中，氯乙酰胺和三(2-羧乙基)膦盐酸盐的终浓度分别为10mM和40mM，1000rpm转速涡旋混匀，37℃反应30min。

7.根据权利要求1所述的全类型生物蛋白质组学样本保存及自动化前处理方法，其特征在于，所述步骤三包括：从6号位的低温盘中第2列吸取10μL 2μg混合的胰蛋白酶和赖氨酸酶，分别加入1号位的恒温混匀摇床上的0.5mL 96孔板中，进行37℃、1000rpm转速震荡孵育2h，孵育结束后，再从7号位的12道槽第2列中吸取100μL 1％三氟乙酸/异丙醇溶剂，加入1号位的恒温混匀摇床上的0.5mL 96孔板中，1000rpm转速震荡孵育2min。