[发明专利]一种表达沉默PD-L1基因的E1A/E1B双突变溶瘤腺病毒及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202210792475.3 | 申请日： | 2022-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN116064422A | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 王华;蔡志坚;徐一鹏 | 申请（专利权）人： | 王华 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/34;C12N15/113;C12N15/85;A61K35/761;A61K39/00;A61K31/713;A61P35/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 天津市尚仪知识产权代理事务所(普通合伙) 12217 | 代理人： | 孙乔乔 |
| 地址： | 310022 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 沉默 pd l1 基因 e1a e1b 突变 溶瘤腺 病毒 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种表达沉默PD-L1基因的E1A/E1B双突变溶瘤腺病毒，其特征在于：所述腺病毒的E1A与RB结合位点两个氨基酸替换突变、E1B55KD缺失、纤毛部分链接RGD、E1A启动子插入CD274的shRNA。
2.一种权利要求1所述表达沉默PD-L1基因的E1A/E1B双突变溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.构建pXC3E1A/E1B-shCD274质粒：
a.构建靶向人CD274145-165位的CD274短发夹RNA；
b.进行E1A(L122S/C124G)突变，并删除E1B-55KD；
c.合成U6-shCD274-E1A启动子-E1A(L122S/C124G)-E1B(19K)全长序列；
d.将U6-shCD274-E1A启动子-E1A(L122S/C124G)-E1B(19K)插入pXC3穿梭质粒中；
S2.构建pBHGloxΔE1E3Cre/RGD质粒：缺失E1和E3，质粒在纤维部分的HI环中链接RGD-4C氨基酸；
S3.将pBHGloxΔE1E3Cre/RGD与pXC3E1A/E1B-shCD274共转染到细胞中，产生溶瘤腺病毒Ad-E1M-RGD-shPDL1。
3.一种权利要求1所述表达沉默PD-L1基因的E1A/E1B双突变溶瘤腺病毒在制备肿瘤疫苗或抗肿瘤药物中的应用。
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