[发明专利]一种基于双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶的莱克多巴胺检测方法

说明书

本发明公开了一种基于双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶的莱克多巴胺检测方法。本发明提出一种DNA水凝胶的制备方法，包括双功能化学纳米的制备、水凝胶侧链聚合物的制备及双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶的制备；并提出以此方法制备得到的DNA水凝胶以及基于双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶的莱克多巴胺检测方法。莱克多巴胺适配体作为水凝胶的交联剂，双功能化学纳米酶均匀嵌入其中，莱克多巴胺与适配体结合，导致水凝胶崩塌并释放嵌入的双功能化学纳米酶，后者催化过氧化氢与TMB反应产生颜色变化，颜色变化与莱克多巴胺浓度呈正相关。该方法检出限低、灵敏度高、重复性好，在实际快速现场检测应用中具有重要价值。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，特别涉及一种基于双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶的莱克多巴胺检测方法。

背景技术

莱克多巴胺(Ractopamine，RAC)是一种人工合成的β肾上腺受体激动剂，最初是为治疗人类和动物的肺部疾病而开发的，但由于具有促进动物生长、降低脂肪含量、增加肌肉、提高动物瘦肉率和饲料利用率的作用，通常用于猪、牛、火鸡等，是典型瘦肉精类物质之一。在家畜的可食用组织中过量使用β激动剂会对人类健康造成危害，包括恶心、头晕和心悸等，甚至导致心脏病或肿瘤。近年来，RAC引起的食品安全问题已成为许多地区和国家关注的焦点，虽然RAC已在包括中国、俄罗斯和欧盟(EU)成员国等160个国家被禁止或限制，但是非法添加RAC用于牟利的企业依然屡见不鲜，导致了长期潜在的健康隐患。

传统检测RAC的方法有高效液相色谱、气相色谱-质谱、液相色谱-质谱、酶联免疫吸附试验(ELISA)、电化学检测方法等，但相关方法前处理和设备操作环节对操作人员专业程度要求较高，很难实现RAC现场快速检测的目标，因此构建准确且简便的RAC检测方法成为亟需解决的技术问题。

发明内容

本发明提出了一种基于双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶的莱克多巴胺检测方法，以解决现有技术中RAC检测方法专业程度要求高、操作复杂、检测过程耗时长的技术问题。

本发明的目的之一，是提供一种基于双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶的制备方法。

包括：

S1、双功能化学纳米酶Pd@Au的制备；

S2、水凝胶侧链聚合物的制备；

S3、Pd@Au-DNA水凝胶的制备，包括S1所得Pd@Au、S2所得聚合物与莱克多巴胺适配体混合制备得到；

其中，S1与S2的制备没有先后顺序，可以同时制备。

进一步地，所述Pd@Au的制备包括：通过取8mM～12mM的氯钯酸钠1mL～3mL，8mM～12mM的四氯金酸0.1mL～1mL，70mg～110mg的氯代十六烷基吡啶和25mL H₂O加入容器中，均匀混合后，轻微摇动并快速加入的新制备的0.05M～0.15M抗坏血酸水溶液0.5mL～2.5mL，容器封闭后，将所得混合物在32℃～38℃下保持不受干扰3小时，合成物清洗备用，得到Pd@Au纳米材料。

进一步地，所述水凝胶侧链聚合物的制备包括：将50μM～150μM的SA/SB 3uL～8uL，8％～12％的聚丙烯酰胺2.0μL～2.5μL于32℃～40℃真空干燥2min～10min，取出后加入0.5％～1.5％的APS 1.0μL～2.0μL和0.5％～1.5％的TEMED 1.0μL～2.0μL，混合后32℃～40℃真空干燥2min～10min，得到水凝胶侧链聚合物。

进一步地，所述Pd@Au-DNA水凝胶的制备包括：将S2所得聚合物与10μM～50μM莱克多巴胺适配体5μL～20μL及S1所得Pd@Au纳米材料5μL～20μL混合于50℃～80℃震荡2min～10min，恢复室温后得到Pd@Au包被的水凝胶。

本发明的目的之二，是提供一种基于双功能化学纳米酶包覆的DNA水凝胶。