[发明专利]一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用，属于生物制品技术领域。本发明利用口蹄疫病毒的反向遗传操作技术，以嵌合口蹄疫当前流行毒株O/XJ/CHA/2017L+P1基因感染性克隆为骨架，进一步用口蹄疫病毒O/SCGH/CHA/2016株的G‑H环基因替换其对等基因，构建重组病毒rHN/XJ/SCGH。和亲本病毒rHN/XJ相比，重组病毒rHN/XJ/SCGH引起100％感染细胞病变的时间缩短到12h，复制滴度显著提高，重组病毒疫苗免疫猪能够对口蹄疫O型四个谱系流行毒产生高水平、保护性的交叉中和抗体，拓展了抗原谱。因此，本发明利用反向遗传操作技术构建的重组病毒rHN/XJ/SCGH适合做FMD疫苗候选株，用于我国当前O型口蹄疫的有效防控。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，涉及一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是猪、牛和羊等主要家畜感染的一种烈性传染病。该病在我国流行已久，对畜牧养殖业的危害巨大。近10年来，我国主要流行A、O型FMD，其中A型FMD趋于控制，而O型FMD依然严重危害我国畜牧养殖业。分析近年来流行的O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)，发现主要为三个拓扑型(中东-南亚(ME-SA)、东南亚(SEA)和古典中国型(Cathay))中的四个谱系病毒株，分别为Mya-98谱系(SEA)、PanAsia谱系(ME-SA)、Ind-2001谱系(ME-SA)和Cathay谱系。我国当前这种O型FMD多谱系病毒株共同流行的复杂局面，加剧了病毒的变异，导致新变异毒株不断出现，频繁引发疫情，给我国FMD的防控提出了前所未有的严峻挑战。

FMDV为小RNA病毒，血清型多，基因和抗原高度易变，使FMD难以防控。不同血清型FMDV缺乏交叉免疫保护，即使同一血清型不同病毒的抗原性也存在较大的差别，血清学交叉反应的程度也不同。对于相同血清型的FMDV，当病毒基因变异积累到一定程度，将导致病毒抗原性的改变，从而使现用疫苗与流行毒株的抗原匹配性下降或抗原不匹配，从而导致疫苗的免疫保护效力下降或免疫失败。如O/Mya-98谱系病毒株自2010年流行至今，结构蛋白VP1上出现规律性氨基酸的变异，导致田间流行毒株和疫苗毒株抗原匹配性降低。我国流行的嗜猪型Cathay谱系病毒株已经遗传进化为四个分支(旧猪毒、新猪毒-1、新猪毒-2、新猪毒-3)，现用疫苗毒株与近几年流行的新猪毒-3分支病毒株抗原不匹配。因此，针对我国目前O型多谱系病毒株共同流行的复杂局面，迫切需要筛选与当前流行的所有O型病毒株抗原高度匹配的疫苗候选株，用于我国FMD的有效防控。

FMDV结构蛋白VP1上含有一个高度易变的G-H环，该环是诱导机体产生中和抗体最重要的抗原表位，在疫苗免疫保护方面发挥着非常重要的作用。研究表明嵌合不同型FMDV的G-H，能够拓展FMD疫苗的抗原谱。鉴于此，为了拓展O型FMD疫苗的抗原谱，本发明通过FMDV的反向遗传操作技术，在嵌合FMDV O/XJ/CHA/2017(Ind-2001谱系)病毒前导蛋白L和结构蛋白P1重组病毒的骨架上，进一步替换O型口蹄疫经典疫苗毒株和我国流行的Cathay谱系病毒株的G-H环基因，构建重组FMDV，从而研究其做为O型FMD疫苗候选株的潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种O型FMD疫苗候选株及其构建方法和应用，构建得到的重组FMDV引起100％感染细胞病变的时间缩短到12h，复制滴度显著提高，重组病毒疫苗免疫猪能够对口蹄疫O型四个谱系(Mya-98谱系、PanAsia谱系、Ind-2001谱系和Cathay谱系)流行毒产生高水平、保护性的交叉中和抗体，拓展了抗原谱。