[发明专利]含非泼罗尼和甲氧普烯的复方制剂中甲氧普烯检测方法

说明书

本发明提供了一种含非泼罗尼和甲氧普烯复方制剂中甲氧普烯含量的检测方法，所述方法可用于测定含非泼罗尼和甲氧普烯的两方、三方或四方混合制剂中甲氧普烯的含量。所述检测方法为高效液相色谱法，其色谱条件如下：以固定比例的流动相A和乙腈的混合溶液为流动相；流速为0.8～1.2mL/min，柱温为20～30℃；检测波长为260～275nm；理论板数按甲氧普烯计算不低于5000。本发明检测方法具有专属性好、线性关系好，稳定性强，重现性好，且检测结果准确等优点。同时，本发明为等度洗脱，对仪器的要求不高，操作更简单快捷，大大缩短了检测时间为现有方法的1/4倍，能提高检测效率，更节约成本。

技术领域

本发明涉及液相色谱分析技术领域，尤其涉及一种含非泼罗尼和甲氧普烯复方制剂中甲氧普烯含量的检测方法。

背景技术

跳蚤和蜱是宠物犬、猫最常见的体外寄生虫，也是很多重要疾病的传播媒介，如立克次氏体病、鼠疫、莱姆病、鼠型斑疹伤寒、蚤传斑点热、巴贝斯虫病等等。而犬、猫在成为家庭伴侣满足人类情感需求的同时，也间接成为了多种人畜共患病的传染源和传播媒介，对人类健康和公共卫生安全构成了威胁。

非泼罗尼是一种苯基吡唑类的新型广谱杀虫剂，其作用机制是与昆虫中枢神经细胞膜上的γ-氨基丁酸(GABA)受体结合，关闭神经细胞的氯离子通道，从而干扰中枢神经系统的正常功能而导致昆虫死亡。而甲氧普烯则是昆虫的生长调节剂(IGR)，是昆虫保幼激素的同类物，对于未成熟阶段昆虫的发育有抑制作用，其作用机制与保幼激素相类似，可导致昆虫发育受阻以及发育阶段的跳蚤死亡。此外，甲氧普烯对跳蚤幼虫和蛹的发育也有很强的抑制作用。含非泼罗尼和甲氧普烯的复方制剂疗效好、不良反应少，是目前在全球范围内广泛应用于驱杀犬、猫体表的成年跳蚤，跳蚤卵、幼虫的体外杀虫剂之一。

含非泼罗尼和甲氧普烯的复方制剂含量的检测主要采用液相检测的方法进行。现有技术中仅有中华人民共和国农业部公告第2410号的复方非泼罗尼滴剂(犬用和猫用)进口注册标准中，对含非泼罗尼和甲氧普烯的两方组成的复方制剂中的甲氧普烯含量检测有相关的分析方法，但没有公开能够有效测定同时含非泼罗尼和甲氧普烯的三方或四方制剂中的甲氧普烯含量分析方法。

众所周知，药物制剂在两种、三种或四种药物成分共存的情况下，其含量测定时所受的杂质、辅料干扰的程度和复杂程度远超原料药及其单方制剂。

同时，现有的农业部第2410号公告的检测方法中，活性成分甲氧普烯色谱峰保留时间漂移的范围过大、峰形效果差，检测波动性较大，极易造成甲氧普烯与其相邻的已知降解产物甲氧普烯顺式异构体、未知降解产物甲氧普烯IMP3的分离度不符合≥1.5的要求，未能达到基线分离，从而影响到活性成分甲氧普烯含量检测准确性和检测效率，方法专属性差。

并且，现有的液相检测方法中，活性成分甲氧普烯的紫外吸收响应比较低，致使甲氧普烯含量线性截距百分比满足不了≤2.0％的要求，从而使得甲氧普烯含量检测不准确。检测溶液稳定性差，需要特别控制，每次检测中还都需要运行一个完整的梯度洗脱程序，操作要求高、耗时长、成本较高。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种含非泼罗尼和甲氧普烯复方制剂中甲氧普烯含量的检测方法。

一种含非泼罗尼和甲氧普烯复方制剂中甲氧普烯含量的检测方法，所述检测方法为高效液相色谱法，其色谱条件如下：检测波长为260～275nm，按甲氧普烯计理论板数不低于5000，以流动相A和乙腈的混合溶液为流动相；其中，流动相A由乙腈、甲醇和质量分数为0.1％的乙酸水溶液按质量比为47：21：32混合得到。

优选地，流动相中流动相A和乙腈的混合溶液的体积比为10～30：70～90，优选为20：80。

优选地，流动相A的pH值为2.5～2.9，优选为2.7±0.05。若pH值进一步升高会影响峰形效果，若pH值进一步降低会影响分离效果、拖尾因子、峰形效果。