[发明专利]一种靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体制备及其应用

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体制备及其应用。本发明所解决的问题，提供一种能够靶向并有效治疗胰腺癌的纳米粒。该靶向性纳米粒的具体制作步骤如下：1)通过将褐藻糖胶脱色、离子交换层析、浓缩、透析、冻干，获得分子量合适且带负电的褐藻糖胶。2)利用DOTAP，DMPC，Chol，DSPE‑PEG2000按照摩尔比1∶1∶1∶0.1通过乙醇注入法制备吉西他滨阳离子脂质体。3)利用静电自组装将褐藻糖胶包裹于阳离子脂质体外层。本发明所制作的纳米粒对胰腺癌细胞生长有较好的抑制作用，是实现靶向治疗胰腺癌的新型载体。

技术领域

本发明涉及一种靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体制备及其应用，属于生物医药领域。

背景技术

胰腺癌是起源于胰腺的消化道恶性肿瘤。发病早期具有成像困难、纤维炎症反应强烈、易产生耐受性以及转移性强等特点。其有较高的发生率和死亡率，预后极差。对胰腺癌进行有效治疗是目前面临的难题，以期望新型治疗方案的产生。

吉西他滨(Gemcitabine，GEM)作为阿糖胞苷开发以来最重要的胞苷类似物，可以抑制癌细胞增殖，是临床上经典的胰腺癌切除辅助化疗药物。其被细胞摄取后，通过结合到新生的DNA链中来扰乱DNA复制，从而抑制细胞的增殖。

脂质体(Liposomes，LPs)是由双分子磷脂膜组成的囊泡状物，是一种可包载药物的靶向释药系统。阳离子脂质体作为非病毒载体，是药物良好的载体。此外，细胞表面存在大量带负电的蛋白多糖，带正电荷脂质体能与细胞膜作用，使脂质体高效穿过细胞膜和核膜。不足的是，阳离子脂质体进入肿瘤细胞及其微环境，只依靠高渗透长滞留效应(Enhanced permeability and retention effect，EPR)进行递送，效果远远不够。因此给脂质体增添靶向性是必不可少的。

褐藻糖胶(Fucoidan，FU)是一种提取自墨角藻的天然硫酸化多糖，具有多种生物活性。其抗肿瘤活性不仅与癌细胞的生长、迁移、凋亡有密切联系，还会影响机体的免疫功能。研究证明褐藻糖胶能靶向P-选择素，对P选择素有高度亲和力。以褐藻糖胶作为靶标靶向P选择素的纳米颗粒，可以在原发瘤和转移瘤模型中定位，产生优异的抗肿瘤效果。

综合考虑胰腺癌的特点，以及吉西他滨所面临的长期用药后药效不佳的障碍。开发一种具有主动靶向胰腺癌的纳米递药系统是十分具有意义的。本发明所制备的脂质体有良好的载药特性且能够主动靶向癌细胞，并且在肿瘤细胞上有天然的P选择素靶点。因此，褐藻糖胶吉西他滨脂质体是一种极具潜力的新型递送载体。

发明内容

本发明根据以上所面临的问题，提供一种靶向胰腺癌的褐藻糖胶吉西他滨脂质体制备及其应用。

本发明中以乙醇注入法结合静电吸附制备褐藻糖胶吉西他滨脂质体。

本发明提供合适分子量及电荷褐藻糖胶的纯化方法。

本发明提供褐藻糖胶的纯化方法，具体步骤如下：

(1)褐藻糖胶粗品脱色。

(2)褐藻糖胶粗品离子交换层析洗脱。

(3)褐藻糖胶洗脱液浓缩，透析。

(4)褐藻糖胶溶液冷冻干燥。

(5)褐藻糖胶冻干粉在干燥器保存。

本发明提供乙醇注入法制备阳离子脂质体。

本发明提供的乙醇注入法，具体步骤如下：

(1)将阳离子脂质，辅助脂质，胆固醇溶于二氯甲烷。

(2)将二氯甲烷在40℃下旋转蒸发，成蜂窝状脂质膜，而后保持温度继续旋转蒸发30分钟。

(3)加入1mL无水乙醇溶解脂质膜。