[发明专利]一种二聚体融合蛋白及其应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种二聚体融合蛋白及其应用。所述二聚体融合蛋白包含：轻链和重链，所述轻链和重链复合以形成表现出对肿瘤抗原或免疫检查点的结合特异性的靶向部分；免疫调节剂，所述免疫调节剂融合至所述轻链的C端以形成多肽链；所述轻链、重链、免疫调节剂复合以形成所述二聚体融合蛋白。所述二聚体融合蛋白对肿瘤相关靶向抗原和IL‑10受体均有较高的亲和力，与癌细胞具有良好的结合活性。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种二聚体融合蛋白及其应用。

背景技术

单克隆抗体(mAb)已经广泛用于治疗多种人类疾病，包括癌症、自身免疫疾病、感染性疾病以及心血管疾病等。目前，存在超过30种单克隆抗体，包括鼠类、全人源化和嵌合抗体，它们已经被FDA批准用于治疗用途。这些抗体大多数是单特异性抗体，其识别单一表位并且可被选择以便通过此单一表位激活或抑制靶分子的活性。

MUC16(CA125)是最大的跨膜粘蛋白，由于已知MUC16在卵巢癌细胞表面过表达并分裂/脱落到血液中，因此它是卵巢癌的一种公认的血清生物标记物。肿瘤发生是一个复杂的过程，涉及细胞内外的各种事件，许多报道表明，跨膜粘蛋白可能在肿瘤发生和进展中发挥多种作用。在促进癌细胞增殖、抗凋亡作用、能量代谢重编程等方面发挥重要作用。

IL-10主要由激活的T细胞和抗原提呈细胞分泌，抗原识别的过程中，CD8+T细胞中的IL-10受体(IL-10R)表达上调。IL-10由特异的细胞表面受体复合物介导多种活性，IL-10受体包含两个不同的链，IL-10R1和IL-10R2，两条链均属于II类细胞因子受体家族(CRF2)。在细菌感染和组织损伤中，IL10可以减少炎症反应，抑制T细胞(Th17)和巨噬细胞引起的炎症反应(IL-12/23)，降低肿瘤相关炎症反应。在肿瘤微环境中，IL-10可以高效激活抗原特异性CD8+T细胞的增殖和毒性。

IL-10抗肿瘤的作用机制为：a.可以激活肿瘤内部CD8+T细胞的活性和扩增；b.IL10可以增加肿瘤内部抗原特异性T淋巴细胞的活性和扩增；c.IL-10对肿瘤的排斥作用具有记忆功能，动物体内试验数据表明，给予IL-10药物肿瘤消失后，再次给予小鼠接种肿瘤细胞，该肿瘤细胞不在小鼠体内生长，主要的原因为：IL-10能够增强抗原特异性CD8+T细胞的存活率，起到肿瘤疫苗的作用；d.IL10通过恢复终端耗竭T细胞的氧化磷酸化代谢来重新激活T细胞达到杀伤肿瘤细胞的目的。临床试验也证明，与PDL1抗体联合使用时，会增加肿瘤内部细胞PDL1特异性CD8+阳性细胞，产生持久的抗肿瘤效果。但目前暂未有以IL-10为靶点的上市药物。

IL-10可以促进针对特异性抗原的CD8+T细胞的扩增和存活期，而特异性抗原CD8+T细胞与免疫细胞对肿瘤的杀伤呈正相关性。虽然已有多项研究表明，免疫调节剂可用于在动物模型和癌症患者中施加抗肿瘤作用，然而，与免疫调节剂的应用相关的短半衰期和系统性毒性极大地限制了它们的使用。IL-10与受体结合以后，启动STAT3、STAT1通路，这两条通路是IL-10起生物功能的信号转导途径。

专利CN201380041222.1中提供了包含IL-10的融合蛋白，公开了特定靶点和序列的优势结构。然而，这种融合蛋白的表达量低，纯度不高，IL-10端的结合活性与信号激活能力弱，与癌细胞结合活性差，无法用于规模化工业生产。此外，该专利也没有公开其他靶点和序列的优势结构。

因此，有必要寻找既与IL-10具有良好结合活性，又与MUC16结合的二聚体融合蛋白。

发明内容

本发明目的在于提供一种二聚体融合蛋白及其应用。该二聚体融合蛋白对MUC16和IL-10受体均有较高的亲和力，且具有良好的抗肿瘤活性。

本发明提供了一种二聚体融合蛋白，所述二聚体融合蛋白包含：轻链和重链，所述轻链和重链复合以形成表现出对肿瘤抗原或免疫检查点的结合特异性的靶向部分；一个或多个免疫调节剂，所述免疫调节剂融合至所述轻链的C端以形成多肽链；所述轻链、重链与免疫调节剂形成所述二聚体融合蛋白。