[发明专利]一种液基细胞制片的方法

说明书

本申请涉及一种液基细胞制片的方法，本申请中的方法通过在液基样品的生理盐水体系中加入苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯组成的混合物，通过离心作用，是杂质细胞与液基细胞实现有效的分离，从而可以避免这些杂质细胞的存在，影响液基细胞的观察，提高检测的效率和准确率。本申请中通过苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯的比例，可以控制液膜的形成，从而更好的实现杂质的去除。本申请中配置了细胞保存处理液，可以使液基细胞保持较好的形态，避免了细胞的萎缩和肿胀破裂等形态变化情况的发生，维持细胞的稳定性，同时细胞保存处理液还可以实现细胞的固定，使细胞易染色，从而提高细胞制片的清晰度，便于后续的病理检验工作。

技术领域

本申请涉及细胞学检测技术领域，尤其是涉及一种液基细胞制片的方法。

背景技术

宫颈癌是目前女性癌症中最常见的恶性肿瘤之一。早期诊断宫颈癌及癌前病变是提高宫颈癌治愈率及患者生存率的关键，细胞学检查是目前临床应用最广泛的筛查子宫颈癌的主要方法。它是以观察细胞结构和形态变化来诊断临床病症的一门学科。几十年来细胞学检查已成为宫颈癌的大规模普查和高危人群随访观察的主要方法，使中晚期宫颈癌发生率大幅度下降。细胞学检查主要有巴氏涂片法和液基细胞检测法，巴氏涂片法存在大量细胞的重叠以及杂质细胞过多，病理医生在判读时非常困难，因而其假阴性率。液基细胞检测法其涂片细胞重叠少、无退变或退变轻微，背景干净清晰，因而液基细胞学检查的敏感性和特异性均优于传统巴氏涂片。

目前液基细胞检测方法中，虽然可以避免大量细胞的重叠，但是仍旧无法解决标本内有大量红细胞、白细胞和粘液问题，这些残留的无效细胞和粘液不仅会影响观察，还容易使有效的宫颈细胞丢失。为了去除红细胞，白细胞和粘液，采用的方法主要有离心法和冲洗法，离心法可以基本去除粘液和白细胞，但是因为宫颈细胞与红细胞的比重相差较小，因而虽然有分界线，但是两者界线不清晰，实质上难以实现完全分离。冲洗法虽然能去除大部分红细胞和白细胞，但也会损失部分宫颈细胞。

针对上述相关技术，发明人认为目前液基细胞检测法中液基细胞纸片中存在着杂质细胞和粘液较多缺陷。

发明内容

为了进一步提高液基细胞检查的精准度和效率，本申请提供一种液基细胞制片的方法。

本申请提供的一种液基细胞制片的方法，采用如下的技术方案：

一种液基细胞制片的方法，包括以下步骤：

S1：将液基样品放入到培养皿中，孵育后，切换至生理盐水体系，然后向培养皿中加入苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯组成的混合物，离心，然后用生理盐水冲洗掉上层的红细胞、白细胞和粘液；再然后用吸走表层液膜，底层即为处理后的液基样品；

S2：向步骤S1中处理后的液基样品中加入细胞保存处理液，充分振荡，对细胞进行定型，得到定型处理后的液基样品；

S3：将步骤S2中定型处理后的液基样品置于沉降仓中进行沉降，沉降后，去除上清液，然后进行巴氏染色，得到染色后的液基样品；

S4：将步骤S3中染色后的液基样品进入离心机的制片仓，通过离心作用，在病理玻片上形成均匀的细胞层，封片后，即可用于检测。

通过采用上述技术方案，红细胞的密度介于1.085～1.12之间，白细胞和粘液的密度是低于红细胞的，而液基细胞(上皮细胞、颈管细胞和底层细胞)的密度在1.21～1.25之间，其各种细胞之间的密度是存在差异的；因而本申请中苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯组成的混合物，调节其比例使其密度介于红细胞和液基细胞的密度之间，由于苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯都是疏水的，因而离心的过程中，其会形成4层，白细胞和粘液层、红细胞层、苯甲酸甲酯和甘油三苯酸甲酯形成的液膜层和液基细胞层，此时用生理盐水可以冲洗掉白细胞和粘液层以及红细胞层，而液膜层疏水的，其覆盖在液基细胞层上，可以保护液基细胞不被冲走。因为其液膜独特的疏水性，会形成一层薄膜，因而冲洗完毕后，只需采用移液枪置于膜层上，轻轻吸附，即可将整张膜去除。因而本申请中的方法，可以将大量的红细胞、白细胞以及粘液进行去除，避免这些杂质细胞的存在，影响液基细胞的观察。