[发明专利]检测女性阴道32种病原微生物的引物组、探针和方法在审
申请号: | 202210802279.X | 申请日: | 2022-07-07 |
公开(公告)号: | CN116064928A | 公开(公告)日: | 2023-05-05 |
发明(设计)人: | 莫维克;张利清;李海琳;杨万春;冯小龙;孙云雷;张豪杰 | 申请(专利权)人: | 鉴诺生物科技(江苏)有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6895;C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/01;C12R1/225;C12R1/35;C12R1/465;C12R1/49;C12R1/645;C12R1/72;C12R1/725;C12R1/93 |
代理公司: | 苏州中合知识产权代理事务所(普通合伙) 32266 | 代理人: | 刘召民 |
地址: | 215000 江苏省苏州市中国(江苏)自由贸易试验区*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 女性阴道 32 病原微生物 引物 探针 方法 | ||
1.检测女性阴道32种病原微生物的引物组和探针,32种病原微生物及对应的引物组和探针的序列如下:
2.检测女性阴道32种病原微生物的方法,采用权利要求1所述的引物组和探针,通过对待测DNA样品中的各病原微生物特异性序列进行荧光定量PCR扩增反应,根据仪器检测结果中荧光标记FAM、JOE、ROX和CY5和内参CY5.5通道扩增曲线Ct值的判读,判断所述待测DNA样品中32种病原微生物存在情况。
3.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,还包括选择人RNAse-P基因作为内参基因,内参基因对应引物和探针序列为:
4.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,还包括将待测DNA样品和阴性质控品、阳性质控品、无模板对照进行荧光定量PCR扩增反应。
5.根据权利要求4所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,所述阳性质控品为可以扩增4种不同荧光的冻干病原微生物;所述阴性质控品为无酶无菌水,其中不含有人源及微生物核酸。
6.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,所述待测DNA样品包括女性阴道分泌物、子宫颈拭子、阴道拭子或提取获得的微生物DNA。
7.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,荧光定量PCR扩增反应体系的终浓度组成为:1~10×PCR Mix、0.1~1μM正向引物、0.1~1μM反向引物、0.1~0.5μM探针、0.5ng/μl以上的模板DNA。
8.根据权利要求7所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,除模板DNA之外的PCR组分采用冻干粉剂形式,在冻干时采用冻干保护剂对PCR组分进行活性保护,所述冻干保护剂包括1mM DTT,1mg/mL BSA,1%w/v明胶,1%w/v Tween 20,0.2M海藻糖,共晶点温度为-18.1℃。
9.根据权利要求2,7或8任意一项所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,所述荧光定量PCR扩增反应的具体过程为:92~97℃预变性5~15分钟,聚合酶链式反应扩增阶段,92~97℃变性10~60s,50~65℃退火及延伸10~30s,并进行35~55个循环。
10.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法,其特征在于,待测DNA样品所检测对应病原微生物有扩增曲线且Ct值<35时判定为阳性。
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