[发明专利]检测女性阴道32种病原微生物的引物组、探针和方法

权利要求书

1.检测女性阴道32种病原微生物的引物组和探针，32种病原微生物及对应的引物组和探针的序列如下：

2.检测女性阴道32种病原微生物的方法，采用权利要求1所述的引物组和探针，通过对待测DNA样品中的各病原微生物特异性序列进行荧光定量PCR扩增反应，根据仪器检测结果中荧光标记FAM、JOE、ROX和CY5和内参CY5.5通道扩增曲线Ct值的判读，判断所述待测DNA样品中32种病原微生物存在情况。

3.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，还包括选择人RNAse-P基因作为内参基因，内参基因对应引物和探针序列为：

4.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，还包括将待测DNA样品和阴性质控品、阳性质控品、无模板对照进行荧光定量PCR扩增反应。

5.根据权利要求4所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，所述阳性质控品为可以扩增4种不同荧光的冻干病原微生物；所述阴性质控品为无酶无菌水，其中不含有人源及微生物核酸。

6.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，所述待测DNA样品包括女性阴道分泌物、子宫颈拭子、阴道拭子或提取获得的微生物DNA。

7.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，荧光定量PCR扩增反应体系的终浓度组成为：1～10×PCR Mix、0.1～1μM正向引物、0.1～1μM反向引物、0.1～0.5μM探针、0.5ng/μl以上的模板DNA。

8.根据权利要求7所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，除模板DNA之外的PCR组分采用冻干粉剂形式，在冻干时采用冻干保护剂对PCR组分进行活性保护，所述冻干保护剂包括1mM DTT，1mg/mL BSA，1％w/v明胶，1％w/v Tween 20，0.2M海藻糖，共晶点温度为-18.1℃。

9.根据权利要求2，7或8任意一项所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR扩增反应的具体过程为：92～97℃预变性5～15分钟，聚合酶链式反应扩增阶段，92～97℃变性10～60s，50～65℃退火及延伸10～30s，并进行35～55个循环。

10.根据权利要求2所述的检测女性阴道32种病原微生物的方法，其特征在于，待测DNA样品所检测对应病原微生物有扩增曲线且Ct值＜35时判定为阳性。