[发明专利]一种生物样品中纳呋拉啡的检测方法

说明书

本发明提供了一种纳呋拉啡的生物样品分析方法，是通过高效、快速、灵敏的液相‑质谱联用系统(LC‑MS/MS)方法对纳呋拉啡进行分析。此方法采取了固相萃取法对生物样本进行前处理，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中纳呋拉啡的浓度。本发明采取了固相萃取法纯化样品，使得检测限非常低，可达0.1pg/mL，本发明方法可专属、灵敏、快速地测定生物样品中纳呋拉啡的浓度，为测定纳呋拉啡在人或动物体内的药代动力学中纳呋拉啡的检测提供了简便的分析方法。

技术领域

本发明属于药物色谱、质谱分析领域，涉及化学品的检测方法，具体涉及一种生物样品中纳呋拉啡的检测方法。

背景技术

纳呋拉啡，化学名：(2E)-N-[(5R,6R)-17-(环丙基甲基)-4,5-环氧-3,14-二羟基吗啡喃-6-基]-3-(3-呋喃基)-N-甲基-丙烯酰胺盐酸盐，其化学结构式如下：

它是高选择性к(kappa)-opioid受体激动剂，用于治疗血液透析相关尿毒症瘙痒。目前，临床应用证明纳呋拉啡耐受性良好，常见不良反应为中枢神经系统(失眠、瞌睡、眩晕和头疼)和胃肠道系统(便秘、恶心和呕吐)，所有的不良反应为暂时的，停药后可恢复。目前，还没有关于检测纳呋拉啡的方法，在此方面产生了技术空白。

发明内容

本发明针对目前对于纳呋拉啡的检验方法方面的空白，提供一种检测纳呋拉啡的检验方法，该方法操作简单，分析快速，而且能应用于多种不同的生物基质。

一种生物样品中纳呋拉啡的检测方法，采用高效液相色谱-质谱联用进行测定，其中，色谱条件：液相型号为SHIMADZU LC-20A或SHIMADZU LC-30A中任意一种型号的液相色谱；色谱柱为SHIMADZU Shim-pack GIST C18-AQ，2.1*50mm，3μm；流动相A相为0.1％甲酸水溶液，流动相B相为0.1％甲酸甲醇，梯度洗脱条件包括如下五个阶段：

第一阶段(0.00-0.80min)：起始流动相比例A:B＝90:10；

第二阶段(0.80-1.50min)：流动相比例由A:B＝90:10B相缓慢上升至A:B＝30:70；

第三阶段(1.50-2.60min)：流动相比例A:B＝30:70；

第四阶段(2.60-2.61min)：流动相比例由A:B＝30:70B相迅速下降至A:B＝90:10；

第五阶段(2.61-3.50min)：流动相比例A:B＝90:10；流速为：0.8mL/min；进样量为：5-10μL。

质谱条件：AB SCIEX API 6500+或QTRAP 6500型号质谱，ESI源，正离子，离子喷射电压为5500V，温度550-600℃，雾化气压力为55psi，解簇电压压力为55psi，气帘气体压力为35-40psi，扫描方式为多重反应监测(MRM)，纳呋拉啡和内标的质谱参数为：

上表中，对于各术语的解释说明如下：

Q1—母离子；Q3—子离子；Dwell time—驻留时间；DP—去簇电压；EP—射入电压；CE—碰撞能量；CXP—碰撞室射出电压。

进一步的，所述固相萃取法的固相萃取小柱为：Phenomenex，Strata^TM-X(30mg，1cc³)。

一种生物样品中纳呋拉啡的检测方法的前处理包括以下步骤：

1)先后使用1mL甲醇和1mL纯水进行固相萃取小柱的活化；