[发明专利]一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法

权利要求书

1.一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂，其特征在于，包括消化液A、消化液B、percoll、DMEM培养基、FBS和PBS；

所述消化液A包括0.2wt.％EDTA、10mM HEPES、1wt.％青霉素-链霉素双抗和余量的PBS；

所述消化液B包括1mg/mL胶原酶II、1mg/mL中性蛋白酶、0.5mg/mL DNA酶I、1wt.％青霉素-链霉素双抗和余量的含10％FBS的DMEM。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，还包括1640培养基。

3.权利要求1或2所述的试剂在制备小鼠肠道固有层淋巴细胞提取试剂盒中的应用。

4.一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

依次利用权利要求1或2所述试剂中的消化液A和消化液B处理待提取的小鼠肠段，分离，得肠固有层细胞；

利用40％percoll离心液重悬肠固有层细胞后，将重悬所得肠固有层细胞悬液缓慢加在75％～80％percoll离心液上方，离心，收集白膜层；

所述白膜层含有所述小鼠肠道固有层淋巴细胞；

以体积百分含量计，所述40％percoll离心液包括：40％percoll原液、10％FBS和50％DMEM培养基；

以体积百分含量计，所述75％～80％percoll离心液包括：75％～80％percoll原液、10％～20％FBS和10％～12.5％DMEM培养基；

以体积百分含量计，所述percoll原液包括90％percoll和10％10×PBS。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述消化液A处理的温度为1～5℃，处理的时间为20min。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述消化液B处理的温度为37℃，处理的时间为60min，处理的转速为200～250r/min。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分离的方式包括过筛和离心；所述过筛包括：收集经消化液A和消化液B处理的小鼠肠段的消化液，依次过70μm细胞筛网和40μm细胞筛网。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述离心的温度为20～25℃，离心力为350～400g，时间为20min。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，收集白膜层后，还包括：利用PBS溶液或1640培养基重悬白膜层细胞，离心得所述小鼠肠道固有层淋巴细胞；所述离心的温度为4℃，离心力为400～500g，时间为10～15min。

10.一种消化装置，其特征在于，包括封闭层(1)、容器(2)和固定元件(3)；所述封闭层(1)上带孔，所述固定元件(3)通过所述孔深入所述容器(2)内部。