[发明专利]一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法

说明书

本发明属于细胞提取技术领域，具体涉及一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法。本发明所述提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂，包括消化液A、消化液B、percoll、DMEM培养基、FBS和PBS；所述消化液A包括0.2wt.％EDTA、10mMHEPES、1wt.％青霉素‑链霉素双抗和余量的PBS；所述消化液B包括1mg/mL胶原酶II、1mg/mL中性蛋白酶、0.5mg/mLDNA酶I、1wt.％青霉素‑链霉素双抗和余量的含10％FBS的DMEM。利用本发明所述试剂处理待提取的小鼠肠段，能够得到更多数量的小鼠肠道固有层淋巴细胞，并且提取时间短，效率高。

技术领域

本发明属于细胞提取技术领域，具体涉及一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法。

背景技术

肠道固有层淋巴细胞是属于肠道免疫系统的固有淋巴细胞(innate lymphoidcells,ILCs)，主要包括树突状细胞、巨噬细胞、NK细胞、淋巴细胞(B细胞和T细胞)、肥大细胞和粒细胞等。这些免疫细胞存在于肠道相关淋巴组织(gut-associated lymphoidtissue，GALT)内，共同构成了人体肠道免疫的“第一防线”。其功能包括非特异性的识别并杀伤病原体以及特异性免疫的抗原传递及下游的适应性免疫应答。GALT从组织学上主要包括肠道集合淋巴结、隐窝结、孤立淋巴滤泡、阑尾以及肠系膜淋巴结等结构。肠道的免疫细胞广泛分布于上述结构，在维持肠道稳态和肿瘤免疫等诸多功能中发挥着重要的作用。

近年来，已经有诸多的证据表明，有诸多物质可以对肠道的免疫细胞产生作用，例如在胃肠道定殖微生物的代谢物可以引导树突状细胞产生不同的分化结果，从而引起树突状细胞的呈递抗原的功能差异，进而引起肠道免疫功能的差异。此外，肠道的免疫失调可以引起多种消化道系统表现甚至疾病，例如食物过敏、肠易激综合征，甚至是炎症性肠病、胃癌等。借由小鼠模型的肠道固有层淋巴细胞的提取可以从一个新的角度进行相关疾病的研究，然而现有的提取方式得到的淋巴细胞的比例极不稳定，获取效率低，使得这些提取方法不能应用。开发一种新的高效提取肠道固有层淋巴细胞的方法非常有必要，提高淋巴细胞获取比例，并且提高提取的效率，可以为基础和临床实验提供一个有效的淋巴细胞获取途径。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法，提高淋巴细胞获取比例，提高提取效率。

本发明提供了一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂，包括消化液A、消化液B、percoll、DMEM培养基、FBS和PBS；

所述消化液A包括0.2wt.％EDTA、10mM HEPES、1wt.％青霉素-链霉素双抗和余量的PBS；

所述消化液B包括1mg/mL胶原酶II、1mg/mL中性蛋白酶、0.5mg/mL DNA酶I、1wt.％青霉素-链霉素双抗和余量的含10％FBS的DMEM。

优选的，还包括1640培养基。

本发明还提供了所述的试剂在制备小鼠肠道固有层淋巴细胞提取试剂盒中的应用。

本发明还提供了一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的方法，包括如下步骤：

依次利用上述技术方案所述试剂中的消化液A和消化液B处理待提取的小鼠肠段，分离，得肠固有层细胞；

利用40％percoll离心液重悬肠固有层细胞后，将重悬所得肠固有层细胞悬液缓慢加在75％～80％percoll离心液上方，离心，收集白膜层；

所述白膜层含有所述小鼠肠道固有层淋巴细胞；

以体积百分含量计，所述40％percoll离心液包括：40％percoll原液、10％FBS和50％DMEM培养基；