[发明专利]可控高突变率谷氨酸棒杆菌工程菌构建及在抗逆育种中应用

权利要求书

1.一种高突变率谷氨酸棒杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，利用基因工程方法敲除或敲降了出发菌中的nucS或/和xpb或/和tagI基因。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，进一步过表达dinP基因。

3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述dinP基因编码的蛋白质的NCBI登录号为CAF20484。

4.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，利用基因工程方法敲除或敲降了出发菌中的nucS、xpb和tagI基因，并进一步还过表达dinP基因。

5.如权利要求1至4任一项所述的构建方法，其特征在于，所述基因工程方法是基于CRISPR-dCpf1系统的基因编辑方法或基于RNA干扰方法。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述基于CRISPR-dCpf1系统的出发载体是质粒pJYS3-dCpf1，基于所述质粒是含有的温度敏感型复制子的质粒，在高温条件下无法复制，进而终止宿主细胞的突变，因而实现可控的高突变率。

7.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述通过CRISPR转录产生的sgRNA介导失去切割活性的dCpf1核酸酶靶向特定所述的nucS、xpb、tagI基因和dinP基因，实现抑制或激活其基因转录，达到对其表达进行调控的目的。

8.如权利要求1至7任一项所述的构建方法获得的高突变率谷氨酸棒杆菌工程菌。

9.如权利要求8所述的高突变率谷氨酸棒杆菌工程菌在获得目标性状、表型或特性的突变菌中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，采用胁迫条件下对所述高突变率谷氨酸棒杆菌工程菌进行培养，对得到的突变菌株进行筛选获得目标性状、表型或特性的突变菌；优选地，用于选育抗逆性能提升的突变菌。