[发明专利]用于检测小米成分的特异性引物、探针、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种用于检测小米成分的特异性引物和探针，所述特异性引物的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述探针的序列如SEQ ID NO.3所示。使用本发明提供的引物和探针对样品中的小米成分进行鉴定，具有结果准确、灵敏度高、结果稳定可靠且假阳性率低等优点，能将小米成分与其他亲源关系比较近的种属混淆品准确的分开，特异性高，且其PCR扩增产物仅为113bp，分子量小，扩增效率高，保证了不同基质的深加工食品中小米成分的特异性鉴别。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用于样品中小米成分的检测方法。

背景技术

随着转基因产品的大量研究及其在日常生活中的广泛应用，转基因产品对人类健康以及生存环境所带来的安全性问题已经引起世人的广泛关注及争论。因此，世界各国在积极研究转基因技术的同时，也对各种转基因食品的检测分析方法进行了大量研究。但由于转基因种类多，数量大，尤其是很多转基因食品经过深加工和各种条件处理保存后，转基因成分大量降解，检测难度加大。因此，需要根据科学技术的发展不断更新和发展各种转基因食品的检测技术，以加强转基因食品监督、监测和管理，减少其商品化可能带来的风险，同时保护公众健康、保护广大消费者知情权和选择权。

特异性基因检测在转基因检测、食品成分检测方法非常重要，食品转基因检测的第一步骤即为食品成分检测。在转基因定性检测中，特异性基因作为质量分数的分母使用。国家标准-转基因产品通用检测方法(GB/T 19495.4-2018)包括了玉米zSSIIb和Adh1、大豆Lectin、油菜CruA和PEP、水稻SPS和PLD、苜蓿ACC基因、甜菜GluA3、马铃薯UGPase，共7大作物的11个特异性基因实时PCR检测方法。但小米等重要的禾本科作物都没有成熟的特异性基因检测方法，且小米同小麦、黑麦、燕麦、黍等禾本科作物同源性较高，导致植物及其加工品中小米成分的鉴别难度很大。

因此，目前亟需一种灵敏度高、特异性强、结果准确可靠且快速简便的用于检测小米成分的方法。

发明内容

本发明解决上述技术问题的方法是提供一种用于检测小米成分的特异性引物和探针，采用所述引物和探针检测小米成分，鉴定结果准确、稳定、可靠、灵敏度高，能够在短时间内对大量待测样品中小米成分进行快速鉴定，效率高。

具体而言，本发明第一方面提供一种用于检测小米成分的特异性引物，所述特异性引物的序列为：

上游引物：5′-GCTGGTCATCGAGCAGGTGG-3′(SEQ ID NO.1)；

下游引物：5′-TTCAGGACTCTTGTCTGCGAAGG-3′(SEQ ID NO.2)。

本发明的第二方面还提供一种用于检测小米成分的探针，所述探针的序列为：5′-AGCTGCTTGAGCCTTCTATCGAGCAGACG-3′(SEQ ID NO.3)。

优选的，所述探针的3′端标记有荧光淬灭基团，5′端标记有荧光报告基团。

优选的，所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2或MGB；所述荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE或HEX。

本发明的第三方面还提供一种用于检测小米成分的试剂盒，所述试剂盒包括上述特异性引物和任选的上述探针。

优选的，所述试剂盒还包括对照品。

优选地，对照品包括阴性对照品和阳性对照品。

优选地，阴性对照为无菌双蒸水。

优选的，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTPs和Taq DNA聚合酶。

本发明的第四方面提供了上述特异性引物、上述探针或上述试剂盒在检测样品中小米成分的应用。