[发明专利]一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法

权利要求书

1.一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.果蔬样品前处理：用有机试剂提取果蔬样品，盐析分层，浓缩复溶得到果蔬样品农药残留提取物；

S2.农药残留安全性评价：取步骤S1中制备的提取物，用稀释储备液进行稀释，取挑选的受试斑马鱼暴露于含有提取液稀释液的微孔板中，一定暴露条件下暴露后，每天观察并记录斑马鱼毒性及死亡情况，经结果处理后评价其安全性。

2.如权利要求1所述的一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，所述步骤S1中果蔬样品前处理如下：称取50g样品于400mL高脚烧杯中，加入100mL乙腈，均质2min，过滤至装有10～14g氯化钠的250mL具塞量筒中，剧烈振摇1min，静置分层，取上层乙腈溶液至100mL梨形瓶中，旋转蒸发至近干，加入1mL甲醇复溶。

3.如权利要求1所述的一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，所述步骤S2中稀释储备液成分及含量为294.0 mg/L CaCl₂·2H₂O、123.3 mg/LMgSO₄·7H₂O、63.0 mg/L NaHCO₃、5.5 mg/L KCl。

4.如权利要求3所述的一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，所述步骤S2中稀释储备液pH在6.5至8.5之间。

5.如权利要求1-4任一项所述的一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，所述受试斑马鱼选取4细胞阶段到16细胞阶段的受精卵进行检测，体视显微镜下观察鱼卵，从4细胞阶段开始，受精卵可以清楚地从非受精卵中分辨出来，若该批次鱼卵的受精率小于70％，则不适用该批鱼卵进行检测。

6.如权利要求1-4任一项所述的一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，所述一定暴露条件为：在实验开始之前，先用标准稀释水预处理六孔板24h，容积为3 mL/孔，26 ± 1℃孵育，15尾/3 mL/孔，将斑马鱼随机分组置于六孔板中，给予样品处理120 h至5 dpf，设实验组、正常对照组和溶剂对照组，实验组每个样品将测试五个浓度/剂量，通常为水溶给样或注射给样，正常对照组用标准稀释水，溶剂对照组溶剂含量不可超出斑马鱼最大耐受量。

7.如权利要求1-4任一项所述的一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，所述步骤S2中观察记录步骤包括：暴露后的斑马鱼每24 h观察记录一次，直到试验结束；以胚胎凝结、体节缺失、尾部未脱离和没有心跳出现四种中的任何一种，即判定胚胎死亡；实验终点5 dpf，在体视显微镜下观察斑马鱼器官和组织毒性。

8.如权利要求7所述的一种用斑马鱼非靶向评价果蔬农药残留安全性的方法，其特征在于，所述步骤S2中结果处理包括：用数据处理分析工具拟合曲线，在1dpf时计算LC₅₀/LD₅₀；在5 dpf总结分析各实验组斑马鱼器官和组织毒性情况，统计其发生率；评价果蔬农残提取物对斑马鱼的毒性浓度/剂量和主要急性毒性靶器官。