[发明专利]检测胃癌外泌体中lncRNA-NEAT1的试剂盒及其在胃癌诊断中的应用

权利要求书

1.lncRNA-NEAT1 在制备胃癌诊断标志物中的应用。

2.lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测试剂或检测试剂盒为血清学检测试剂或试剂盒。

4.根据权利要求2 或3 所述的lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测试剂或试剂盒用于检测生物样品中lncRNA-NEAT1 的表达量。

5.根据权利要求2 或3 所述的lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂

盒中的应用，其特征在于，所述的检测试剂或试剂盒包括：对lncRNA-NEAT1 具有检测特异性的探针、基因芯片，或PCR引物。

6.根据权利要求4 所述的lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的生物样品选自：获自对象的胃癌外泌体、新鲜组织或细胞、福尔马林固定或石蜡包埋组织或细胞、血液或体液。

7.根据权利要求4 所述的lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的生物样品为胃癌外泌体。

8.根据权利要求5 所述的lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的对lncRNA-NEAT1 具有检测特异性的PCR 引物如下：

lncRNA NEAT1上游引物： 5’-GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT-3’，

下游引物：5’-CCTCATCCCTCCCAGTACC -3’；

内参 GAPDH上游引物： 5’- GCAACTAGGATGGTGTGGCT -3’，

下游引物：5’-TCCCATTCCCCAGCTCTCATA -3’。

9.一种检测胃癌外泌体中lncRNA-NEAT1 的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：

A、逆转录系统，由逆转录体系缓冲液、引物、dNTPs、逆转录酶和RNA 酶抑制剂组成；

B、引物系统，

lncRNA NEAT1上游引物： 5’-GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT-3’，

下游引物：5’-CCTCATCCCTCCCAGTACC -3’；

内参 GAPDH上游引物： 5’- GCAACTAGGATGGTGTGGCT -3’，

下游引物：5’-TCCCATTCCCCAGCTCTCATA -3’

C、扩增系统，由SYBR Green Mix试剂盒的试剂组成。

10.一种利用如权利要求9 所示的检测胃癌外泌体中lncRNA-NEAT1 的试剂盒的检测方法，具体步骤如下：

采用Trizol试剂（美国 Invitrogen公司）从组织样本中提取总 RNA，采用NanoDrop2000光度计测定RNA 浓度和纯度，采用试剂盒进行逆转录反应，获得 cDNA，在2720型热循环 PCR系统中使用SYBR Green Mix试剂盒对cDNA产物进行扩增，

lncRNA NEAT1上游引物： 5’-GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT-3’，

下游引物：5’-CCTCATCCCTCCCAGTACC -3’；

内参 GAPDH上游引物： 5’- GCAACTAGGATGGTGTGGCT -3’，

下游引物：5’-TCCCATTCCCCAGCTCTCATA -3’；

PCR 扩增条件包括以下三个步骤：第一步 95.0 ℃ 2min；第二步 95.0 ℃ 15s，58℃40s（共 40个循环）；第三步（分离阶段），95.0 ℃ 15s， 60.0 ℃ 15s， 95.0 ℃ 15s 自动记录NEAT1 和 GAPDH，用２－ΔΔCt表示lncRNA NEAT1 的相对表达量。