[发明专利]检测胃癌外泌体中lncRNA-NEAT1的试剂盒及其在胃癌诊断中的应用

说明书

本发明公开了lncRNA‑NEAT1在制备胃癌诊断标志物中的应用，同时还公开了一种检测胃癌外泌体中lncRNA‑NEAT1的试剂盒及其在诊断学中的应用。通过使用实时荧光定量PCR技术，对捕获的外泌体中lncRNA NEAT1表达量进行检测，胃癌细胞系外泌体的捕获方法能够高效捕获胃癌外泌体；早期辅助性诊断的体外方法，能够为胃癌患者早诊断早治疗提供技术支持，对体外诊断试剂盒的开发等有深远意义。

技术领域

本发明涉及肿瘤细胞生物学及分子生物学，具体涉及检测胃癌外泌体中lncRNA-NEAT1的试剂盒及其在胃癌血清学诊断中的应用。

背景技术

胃癌是全球范围内的第四大癌症，但是其发病具有很明显的地理差异，亚洲地区，尤其东亚的发病率要明显高于其他地区。我国是胃癌发病的大国，每年新发胃癌68万例，约占世界范围内胃癌患者的40%~50%。由于胃癌早期没有明显的临床症状，况且早期胃癌的筛查工作开展较少，现阶段胃癌患者在确诊时多数已经是进展期胃癌。早期胃癌的治疗主要以手术切除为主，视病情配合放疗和化疗，部分患者可以治愈，但是仍然有50% 的复发率。进展期胃癌的治疗主要是以放化疗为主。传统的放化疗带来了一定的生存获益，但目前胃癌总体生存率仍不理想，5年生存率在30%左。早期缺乏典型症状会导致确诊延迟和转移。提高早期诊断率可显著增加治疗成功的机会。但是目前关于胃癌发生的分子机制知之甚少，为寻找早期有效的诊断指标带来了一定的困难。识别肿瘤相关基因改变可以为胃癌的诊断和治疗提供一定的思路。高通量筛选技术使得识别基因表达谱成为可能，2007年，Hutchinson等通过芯片技术筛选得到的一种维持亚核体完成性所必须的长链非编码RNA，命名为NEAT1。大约40%的长链非编码RNA是以反义方式转录到其他基因上的，它们通过顺式作用机制调节相邻蛋白质编码基因的表达，通过反式作用机制调节位于其他染色体上的基因的表达。越来越多的研究表明，长链非编码RNA在多种肿瘤生物学过程中发挥着重要作用，包括肿瘤发生、细胞凋亡、分化、增殖、血管生成和转移。

外泌体是由动态内吞形成的30-100nm细胞外微泡。研宄表明,几乎所有细胞均可产生外泌体,并释放于胞外体液中,包括血浆、尿液、唾液、羊水、腹水、脑脊液等。从细胞表面释放后,外泌体具有与受体细胞的质膜融合以将其内容物递送到细胞质中的能力。外泌体的含量是复杂的,包含多种生物活性蛋白、脂质、DNA和miRNA等并通过运输这些功能物质在细胞通讯中充当介质。外泌体中含有高度富集的特异性蛋白,如肿瘤易感基因101蛋白、CD63、热休克蛋白70、热休克蛋白90、CD9和CD81等,这 些通常被用作鉴定外泌体的标志物。文献报道外泌体是介导肿瘤细胞和微环境细胞通讯的关键因子,它们在促进肿瘤生长、肿瘤发生、肿瘤血管生成、肿瘤免疫逃逸、耐药和转移等方面发挥重要作用。外周血中的外泌体既可能来源于肿瘤细胞，也可由非肿瘤细胞释放，导致肿瘤外泌体所携带的DNA信息被大量非肿瘤细胞外泌体DNA所稀释，无法准确反映肿瘤的分子特征。这是外泌体应用于临床的一大难题。外泌体是活细胞分泌的人体细胞和癌症活细胞产生分泌到细胞外介导信号转导和物质运输双层纳米囊泡。囊泡主要包含膜系蛋白、microRNAs和exoDNA等，不易被降解，能够实时反映患者的健康状况信息。虽然CD63、CD9、CD81和TSG101等常用于检测外泌体，但却并不具有肿瘤特异性，因而造成肿瘤基因诊断的敏感性和特异性低。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种长链非编码lncRNA-NEAT1 的新用途，具体是lncRNA-NEAT1 作为胃癌细胞系外泌体诊断标志物的应用，以及在制备肝癌血清学诊断试剂或试剂盒中的应用。

本发明的另一个目的在于提供一种检测血清或胃癌细胞系外泌体中ncRNA-NEAT1的试剂盒，及其该试剂盒在诊断中的应用。

所述的lncRNA-NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用，所述的生物样品选自：获自对象的胃癌外泌体、新鲜组织或细胞、福尔马林固定或石蜡包埋组织或细胞、血液或体液。

在现有技术中，多用检测血清来作为检测的对象，本发明还提供一种可以利用癌细胞外泌体作为检测对象。