[发明专利]一种基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，包括以下组分：

可识别病毒靶标序列的DNA纳米器件；

催化发夹；

RNA报告分子；

检测反应体系。

2.根据权利要求1所述的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述RNA报告分子5‘端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团BHQ1。

3.根据权利要求1所述的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测反应体系包括镁离子、Bst链置换聚合酶、dNTPs、1×PBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述可识别病毒靶标序列的DNA纳米器件由病毒特异性引物寡核苷酸序列（p）与其互补寡核苷酸序列（t*+p*）通过退火处理制备而成，其中t*作用在于提供一段用于启动链置换反应的支点链，碱基数量可为5bp至10bp其中之一，p*作用在于提供引物结合的一段互补寡核苷酸序列，碱基数量可为7bp至12bp其中之一。

5.根据权利要求1所述的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述可识别病毒靶标序列的DNA纳米器件上含有一段被封闭的病毒特异性引物寡核苷酸序列（p），碱基数量可为7bp至12bp其中之一，待测病毒靶标寡核苷酸序列与引物互补寡核苷酸序列（t*+p*）结合，通过DNA链置换反应将引物（p）从DNA纳米器件中释放出来。

6.根据权利要求1所述的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述催化发夹包括茎、环和一个引物结合位点的垂悬部分（p*），其中茎部分的5’端含有一段靶标序列（A）及其寡核苷酸特异性互补的序列（A*），碱基数量可为18bp至26bp其中之一，用于识别DNA纳米器件并引发链置换与PER反应，同时靠近环部分即茎的3’端含有DNA核酸酶寡核苷酸序列（D）及其寡核苷酸特异性互补的序列（D*），用于识别与切割RNA荧光探针，并产生荧光信号。

7. 根据权利要求6所述的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述催化发夹3’端碱基采用Inverted dT或“-TTTTTTT-”修饰，防止聚合酶驱动靶标核苷酸链的延伸。

8.根据权利要求7所述的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述催化发夹茎-环交接区的2个碱基进行甲基化修饰，主要作用是稳定环结构以形成发夹结构，同时其引入修饰可防止聚合酶介导的链置换反应破坏发夹结构。