[发明专利]一种基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒

说明书

本发明公开一种基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，包括以下组分：可识别病毒靶标序列的DNA纳米器件；催化发夹；RNA报告分子；检测反应体系；所述RNA报告分子5‘端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团BHQ1。所述检测反应体系包括镁离子、Bst链置换聚合酶、dNTPs、1×PBS缓冲液；本发明试剂盒具有特异性好，灵敏度高，方法简单，耗时短，能快速检测病毒的特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体讲是一种基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒。

背景技术

病毒是一类严重威胁着人类健康的细胞内寄生微生物，且绝大多数的人类传染病都是由病毒引起，如流感、天花、肝炎、麻疹、脊髓灰质炎、狂犬病、疯牛病、爱滋病以及最近的大流行新冠肺炎等。因而，快速、有效和灵敏的病毒检测，是目前预防、控制甚至消灭病毒的前提与基础。

传统的病毒检测技术包括直接血凝技术、聚合酶链反应(PCR)技术、基因探针技术、酶联免疫技术以及电子显微镜技术等，但这些检测方法耗时，结果不易重复，且需要有经验的技术人员。基于抗原-抗体的酶联免疫吸附试验技术，由于免疫学的方法灵敏度低，不能在发病早期就检测出病毒，这样就会导致误诊，并增加了病人的负担；虽然PCR技术灵敏度高，可从痕量样品中检测出目标分子，但其开展条件要求严格，需要精密昂贵的检测仪器、实验室环境及专业操作人员，并且耗时长。

生物传感器技术相对于传统的检测方法最主要的优点是其有很高的灵敏度，能够在恒温条件下对待测靶标物质进行高灵敏的检测。这主要是由于生物传感器具有检测信号放大效应，基于信号放大的核酸检测方式主要包括两种：一种是借助工具酶的核酸扩增技术，如RCA技术、SDA技术和RPA技术等；另一种是不依赖酶信号放大技术，如催化发夹自组装反应(CHA)、杂交链式反应(HCR反应)。然而，这些核酸检测方法使用过程中，一方面对条件要求严格，需要精密昂贵的检测仪器、实验室环境及专业操作人员；另一方面需要多级热循环、复共轭性，要么需要精心设计的探针供靶标延伸。

因此，要实现病毒的感染监控，亟待研制一种特异性好，灵敏度高，方法简单，耗时短，能快速检测病毒的检测试剂盒。

发明内容

本发明旨在至少部分地克服现有技术中存在的上述和/或其他潜在的问题：提供一种特异性好，灵敏度高，方法简单，耗时短，能快速检测病毒的基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒。

本发明提供一种基于DNAzyme与PER扩增的病毒检测试剂盒，包括以下组分：可识别病毒靶标序列的DNA纳米器件；催化发夹；RNA报告分子；检测反应体系；

所述RNA报告分子5‘端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团BHQ1。

所述检测反应体系包括镁离子、Bst链置换聚合酶、dNTPs、1×PBS缓冲液。

所述可识别病毒靶标序列的DNA纳米器件如图1所示，由病毒特异性引物寡核苷酸序列(p)与其互补寡核苷酸序列(t*+p*)通过退火处理制备而成，其中t*作用在于提供一段用于启动链置换反应的支点链，碱基数量可为5bp至10bp其中之一，p*作用在于提供引物结合的一段互补寡核苷酸序列，碱基数量可为7bp至12bp其中之一。

所述可识别病毒靶标序列的DNA纳米器件上含有一段被封闭的病毒特异性引物寡核苷酸序列(p)，碱基数量可为7bp至12bp其中之一，待测病毒靶标寡核苷酸序列与引物互补寡核苷酸序列(t*+p*)结合，通过DNA链置换反应将引物(p)从DNA纳米器件中释放出来。