[发明专利]TBL1XR1基因及其gRNA在制备提升T细胞功能药物中的应用

权利要求书

1.TBL1XR1基因及其gRNA在制备提升T细胞功能药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，设计编码序列外显子4序列，检测引导Cas9蛋白特异性剪切TBL1XR1编码序列，抑制TBL1XR1表达的3个gRNA序列。

3.一种gRNA，其特征在于，所述gRNA的核苷酸序列选自：

1)如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.5所示的任一种核苷酸序列；

2)将所述1)中的核苷酸经过一个或多个碱基的取代和/或缺失和、或添加与1)中的核苷酸序列具有同样功能的核苷酸序列。

4.权利要求3所述的gRNA在敲除TBL1XR1基因中的应用。

5.CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向特异性敲除T细胞中TBL1XR1的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)TBL1XR1-gRNA的设计：根据NCBI Gene上TBL1XR1的基因序列，结合CRISPR/Cas9基因编辑原理，选取位于TBL1XR1基因外显子4的3个位点，设计3条gRNA序列；

2)RNP的制备：将CRISPR-Cas9蛋白和3条gRNA共同孵育，制备成RNP复合物；

3)电转：利用Lonza 4D-Nuclefector电转仪电转T细胞，用P3 Primary cell 4D-Nuclefector X Kit试剂盒将RNP复合物电转入T细胞中；

4)电转模式：activated human T cell。