[发明专利]TBL1XR1基因及其gRNA在制备提升T细胞功能药物中的应用

说明书

本发明提供TBL1XR1基因及其gRNA在制备提升T细胞功能药物中的应用，通过设计编码序列外显子4序列，检测引导Cas9蛋白特异性剪切TBL1XR1编码序列，抑制TBL1XR1表达的3个gRNA序列。本发明通过RNA测序，发现TBL1XR1基因在不同耗竭程度的T细胞中表达差异显著，并且TBL1XR1的表达伴随T细胞耗竭程度的升高而不断上调，TBL1XR1的表达水平与TIM‑3呈现高相关性，而与PD‑1的表达则呈现中度相关；本发明通过敲除TBL1XR1，下调了T细胞表面的PD‑1、TIM‑3和LAG‑3抑制性受体的表达，从而增强了T细胞的杀伤能力。

技术领域

本发明涉及T细胞分子生物领域，具体涉及TBL1XR1基因及其gRNA在制备提升T细胞功能药物中的应用。

背景技术

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其中约90％的原发性肝癌为肝细胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)(Villanueva,A.,Hepatocellular Carcinoma.NEngl J Med,2019.380(15):p.1450-1462.)，其不仅在全球发病率位居第六位，还是全球第三位的癌症死因(Forner,A,et al.Hepatocellular carcinoma.Lancet,2018.391(10127):p.1301-1314.)。目前，仅10-25％早期HCC患者可以用手术切除、消融术和肝移植进行治疗，绝大多数的HCC患者被确诊时已经发展到中晚期，缺乏有效的治疗手段(Yang,J.D.,et al.,A global view of hepatocellular carcinoma:trends,risk,preventionand management.Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2019.16(10):p.589-604.)。尽管现已有多重激酶抑制剂(索拉菲尼(Bruix,J,et al.,Adjuvant sorafenib forhepatocellular carcinoma after resection or ablation(STORM):a phase 3,randomised,double-blind,placebo-controlled trial.Lancet Oncol,2015.16(13):p.1344-54.)、乐伐替尼(Kudo,M.,et al.,Lenvatinib versus sorafenib in first-linetreatment of patients with unresectable hepatocellular carcinoma:a randomisedphase 3 non-inferiority trial.Lancet,2018.391(10126):p.1163-1173.)、瑞戈非尼(Bruix,J.,et al.,Regorafenib for patients with hepatocellular carcinoma whoprogressed on sorafenib treatment(RESORCE):a randomised,double-blind,placebo-controlled,phase 3 trial.Lancet,2017.389(10064):p.56-66.))和VEGFR2拮抗剂(雷莫芦单抗)(Zhu,A.X.,et al.,Ramucirumab after sorafenib in patients with advancedhepatocellular carcinoma and increased alpha-fetoprotein concentrations(REACH-2):a randomised,double-blind,placebo-controlled,phase 3 trial.LancetOncol,2019.20(2):p.282-296.)可以进行选择治疗，但其有效性却非常有限。近期，基于T细胞的嵌合性抗原受体-T(chimeric antigen receptor-T，CAR-T)细胞免疫疗法在临床试验中展现出可观的疗效(Shi,D.,et al.,Chimeric Antigen Receptor-Glypican-3 T-Cell Therapy for Advanced Hepatocellular Carcinoma:Results of Phase ITrials.Clin Cancer Res,2020.26(15):p.3979-3989.)，这提示着HCC是一种对免疫疗法敏感的肿瘤，因而免疫疗法有望成为治疗中晚期HCC的最有希望的手段。