[发明专利]一种生产D-柠檬烯的重组酵母菌株及其构建方法在审
| 申请号： | 202210820746.1 | 申请日： | 2022-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN115710557A | 公开（公告）日： | 2023-02-24 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;孙正艳;陈坚;崔佳;吕雪芹;堵国成;方杰;李江华;董金儒;刘延峰;孔晓 | 申请（专利权）人： | 江南大学;鄂尔多斯市中轩生化股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/54;C12N15/53;C12N15/60;C12P5/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生产 柠檬 重组 酵母 菌株 及其 构建 方法 | ||
1.一种生产D-柠檬烯的重组酵母菌株，其特征在于，所述的菌株以酿酒酵母MKL8为宿主，敲除了柠檬酸合酶基因CIT2和谷氨酸脱氢酶(NADP(+))基因GDH1，并增加了柠檬烯合酶tLimS拷贝数。
2.根据权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的柠檬烯合酶tLimS的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的柠檬烯合酶tLimS基因通过诱导型启动子GAL10进行表达。
4.根据权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的柠檬烯合酶tLimS的表达位点为酿酒酵母基因组的1021b位点、208a位点、308a位点、720a位点、YPRCδ15c位点、1014a位点中的至少两处。
5.根据权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的柠檬烯合酶tLimS的拷贝数由2增加至6。
6.根据权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的重组酵母菌株还包括将柠檬烯合成途径酶定位至线粒体表达。
7.根据权利要求1所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的柠檬烯合成途径酶包括甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因IDI、截短的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因tHMG1、乙酰乙酰辅酶A硫解酶基因ERG10、β-羟-β-甲戊二酸单酰辅酶a合酶基因ERG13、甲羟戊酸激酶基因ERG12、磷酸甲羟戊酸ERG8和焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶ERG19、法尼基焦磷酸合酶突变体基因ERG20ww和柠檬烯合酶基因tLimS。
8.根据权利要求7所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述的截短的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因tHMG1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
9.根据权利要求8所述的重组酵母菌株，其特征在于，所述法尼基焦磷酸合酶突变体基因ERG20ww是对法尼基焦磷酸合酶基因ERG20 96位苯丙氨酸突变为色氨酸，127位天冬酰胺突变为色氨酸得到。
10.权利要求1～9任一项所述的重组酵母菌株在发酵生产D-柠檬烯中的应用。
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