[发明专利]一种基于RPA-LFD技术的小普林藻检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202210824274.7 | 申请日： | 2022-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN116004879A | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 黄海龙;姜海波;罗宁建;王鑫威 | 申请（专利权）人： | 宁波大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/89 |
| 代理公司： | 武汉大楚知识产权代理事务所(普通合伙) 42257 | 代理人： | 杨旭瑞 |
| 地址： | 315211 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 rpa lfd 技术 小普林藻 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种检测水样中小普林藻的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：提取所述水样中的DNA；
S2：通过重组酶聚合酶扩增法扩增特征位点，得到RPA扩增产物，所述特征位点的序列如SEQ ID NO:4所示；
S3：检测所述RPA扩增产物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中，扩增所述特征位点所用的引物序列如SEQ ID NO:12和13所示。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S2中，扩增温度为39℃，扩增时间为15min。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S3中，通过横向流动测试法检测所述RPA扩增产物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在S2中扩增体系中加入了带有标签的探针，S3中使用固定了能够捕获所述标签的物质的横向流动试纸条检测所述RPA扩增产物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述探针的序列如SEQ ID NO:16所示，所述标签为羧基荧光素。
7.一种用于检测小普林藻的试剂盒，其特征在于，包括扩增用试剂和显示用试剂，所述扩增用试剂包括用于扩增特征位点的引物组，以及与扩增产物结合探针，所述特征位点的序列如SEQ ID NO:4所示，所述探针上设置有标签，所述扩增用试剂为用于重组酶聚合酶扩增法的试剂；
所述显示用试剂包括能够捕获所述标签的横向流动试纸条。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组的引物的序列如SEQ ID NO:12和13所示。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述探针的序列如SEQ ID NO:16所示，所述标签为羧基荧光素。
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