[发明专利]用于转基因抗草甘膦棉花ZD131特异性鉴定分子标记的引物组及其应用

权利要求书

1.一种用于转基因抗草甘膦棉花ZD131特异性鉴定分子标记的引物组，其特征在于：

所述的引物组包括两对引物，分别为引物对ZD131LB和引物对ZD131RB；

引物对ZD131LB的序列为：5’-ACAGTTAGGGGCAAAATCAGA-3’和5’-TCTAAGCCCCCATTTGGACG-3’，分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

引物对ZD131RB的序列为：5’- TGACCATGATGCATGTGCTGG -3’和5’-AAATGGCCTCCATTATTTGGCT -3’，分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。

2.权利要求1所述引物组的应用，其特征在于：在转基因抗草甘膦棉花ZD131特异性分子标记和鉴定中的应用。

3.根据权利要求3所述引物组的应用，其特征在于：所述的转基因抗草甘膦棉花ZD131具体为转基因抗草甘膦棉花，取名为转基因抗草甘膦棉花ZD131，转基因抗草甘膦棉花ZD131是在棉花基因组中插入外源基因而获得，外源基因是由两个序列相同的抗草甘膦基因CP4 EPSPS串联构成，抗草甘膦基因CP4 EPSPS的基因序列如SEQ ID NO.5。

4.应用于权利要求1或2所述引物组的鉴定方法，其特征在于：

1）使用CTAB法分别提取待测棉花的叶片DNA；

2）使用引物对ZD131LB和引物对ZD131RB对提取到的叶片DNA进行PCR扩增，并以UBQ为内参基因监测DNA质量；

3）PCR扩增产物使用1%琼脂糖凝胶进行电泳，经GelRed核酸染料浸染后，由凝胶成像仪紫外曝光显色，并拍照；

4）通过检测引物对ZD131LB和ZD131RB对ZD131株系基因组处理后是否扩增出目的片段条带，若扩增出则为转基因抗草甘膦棉花ZD131，否则不为转基因抗草甘膦棉花ZD131。

5.根据权利要求4所述的引物组的鉴定方法，其特征在于：

所述步骤2）中，PCR扩增的扩增体系为50 μL，包含50ng DNA、每种dNTP各0.2mM 、每条引物各0.4μM、0.2U Taq DNA polymerase；扩增条件为94℃预变性3min，热循环体系为94℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸1min，循环数为30个，最后72℃延伸5 min。