[发明专利]用于转基因抗草甘膦棉花ZD131特异性鉴定分子标记的引物组及其应用

说明书

本发明公开了一种用于转基因抗草甘膦棉花ZD131特异性鉴定分子标记的引物组及其应用。所述的引物组包括两对引物，分别是引物对ZD131LB和引物对ZD131RB；引物对ZD131LB序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；引物对ZD131RB的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。本发明设计并构建了引物对ZD131LB和ZD131RB，能特异性识别和鉴定ZD131外源基因插入位点。

技术领域

本发明属于转基因技术领域的一种引物组及其应用，具体来说，涉及一个新型的抗草甘膦棉花株系ZD131及用于鉴定的特异性分子标记、引物组和应用。

背景技术

棉花是一种重要的经济作物，是纺织、精细化工的重要原料和重要的战略物资。棉籽富含脂肪和蛋白质，其棉籽油和棉籽饼等分别用于食用油、工业油和饲料等产业。

棉花在自然条件下的生长受到多种因素的影响。这些因素包括病虫害、细菌、真菌和杂草等生物因素，以及干旱、高温、寒冷、高盐和重金属污染等非生物因素。杂草与农作物竞争水、肥、光等，是与作物竞争的生物因素，严重影响棉花个体的生长发育，造成棉花产量降低与品质的下降，是许多农业系统的一大威胁。草甘膦是在世界农业中具有划时代意义的除草剂，它是一种内吸传导型广谱灭生性除草剂，是最有效的广谱性、非选择性、出苗后全能型除草剂，无土壤残留活性，便于经济地控制杂草生长，对人类和环境的风险较低。棉花本身不抗草甘膦，但是通过基因工程技术将抗草甘膦基因转化入棉花基因组可以创制出抗草甘膦棉花，为棉田快速除草提供可能。

自主研发高水平抗草甘膦特性的转基因棉花品种尤为必要。此外，明确外源基因的插入位置，研发特异性识别插入位点的引物组，是棉花品种鉴定的重要手段。

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明提供了一种用于鉴定转基因抗草甘膦棉花ZD131株系的特异性分子标记引物组及其鉴定方法。

本发明所采用的的技术方案是：

一、一种用于转基因抗草甘膦棉花ZD131特异性鉴定分子标记的引物组：

所述的引物组包括两对引物，分别为引物对ZD131LB和引物对ZD131RB；

引物对ZD131LB的序列为：5’-ACAGTTAGGGGCAAAATCAGA-3’和5’-TCTAAGCCCCCATTTGGACG-3’，分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

引物对ZD131RB的序列为：5’- TGACCATGATGCATGTGCTGG -3’和5’-AAATGGCCTCCATTATTTGGCT -3’，分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。

在转基因抗草甘膦棉花ZD131特异性分子标记和鉴定中的应用。

所述的转基因抗草甘膦棉花ZD131具体为转基因抗草甘膦棉花，取名为转基因抗草甘膦棉花ZD131株系，转基因抗草甘膦棉花ZD131是在棉花基因组中插入外源基因而获得，外源基因是由两个序列相同的抗草甘膦基因CP4 EPSPS串联构成，抗草甘膦基因CP4EPSPS的基因序列如SEQ ID NO.5。

外源基因位点的左侧的核苷酸序列为SEQ ID NO.6，外源基因位点的右侧的核苷酸序列为SEQ ID NO.7。

二、引物组的鉴定方法：

经核苷酸测序确定，ZD131株系中外源基因的插入位点位于棉花D亚组7号染色体第51474116nt处，且该插入位点位置唯一。

根据外源基因两侧序列以及ZD131株系基因组上插入位点的侧翼序列，利用本发明设计的插入位点两侧的特异性引物对ZD131LB和ZD131RB特异性识别棉花ZD131株系，同时也对非转基因对照组材料WT进行特异性识别处理。

如果使用ZD131LB和ZD131RB引物组中的一对或者能扩增出条带，可视为ZD131株系后代。